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龙图腾网恭喜中国海洋大学三亚海洋研究院申请的专利一种豹纹鳃棘鲈皮肤组织离体培养获得色素细胞的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119144548B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-11发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411670298.7，技术领域涉及：C12N5/071；该发明授权一种豹纹鳃棘鲈皮肤组织离体培养获得色素细胞的方法是由包振民;马嘉忆;胡景杰;叶质设计研发完成，并于2024-11-21向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种豹纹鳃棘鲈皮肤组织离体培养获得色素细胞的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种豹纹鳃棘鲈皮肤组织离体培养获得色素细胞的方法，包括以下步骤：步骤A：配置原代细胞培养液；步骤B：对豹纹鳃棘鲈皮肤组织进行预处理，得到预处理鱼皮组织；步骤C‑1：通过酶解法对预处理鱼皮组织进行消化反应得到外植体；步骤C‑2：通过外植体法对外植体进行离体培养得到豹纹鳃棘鲈皮肤组织原代色素细胞。将豹纹鳃棘鲈皮肤组织通过酶解法与外植体法相结合成功分离并培养出豹纹鳃棘鲈皮肤组织原代色素细胞组，实现了几种色素细胞的共存培养。为探究色素细胞自身功能、基因调控机制提供原料，并为进一步探究色素细胞对体色的影响提供离体验证实验前提条件。同时，也为豹纹鳃棘鲈的良种繁育奠定基础。

本发明授权一种豹纹鳃棘鲈皮肤组织离体培养获得色素细胞的方法在权利要求书中公布了：1.一种豹纹鳃棘鲈皮肤组织离体培养获得色素细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤A：配置原代细胞培养液，所述原代细胞培养液包括DMEM、FBS、三抗、TPA溶液和BFGF溶液；所述FBS为所述原代细胞培养液体积的14.0-14.5%、14.5-15.0%或15.0-15.5%；所述三抗为3×三抗；所述3×三抗由终浓度为300IUmL的青霉素、300μgmL的链霉素和750ngmL的两性霉素B组成；所述TPA溶液的终浓度为9.5-9.8ngmL、9.8-10.0ngmL或10.0-10.2ngmL；所述BFGF溶液的终浓度为19.5-19.8ngmL、19.8-20.0ngmL或20.0-20.2ngmL；步骤B：对豹纹鳃棘鲈的皮肤组织进行预处理，得到预处理鱼皮组织；所述步骤B包括：步骤B-1：从所述豹纹鳃棘鲈中取下皮肤组织；步骤B-2：将所述皮肤组织利用不同抗生素浓度的DPBS缓冲液漂洗，得到所述预处理鱼皮组织；步骤C-1：通过酶解法对所述预处理鱼皮组织进行消化反应得到外植体；将所述预处理鱼皮组织利用第一消化液进行第一消化反应后离心得到第一沉淀；利用DPBS缓冲液重复清洗、离心所述第一沉淀3遍后得到第四沉淀，所述离心的条件为转速1000rmin下离心5min；利用第二消化液消化所述第四沉淀即为第二消化反应，得到第二消化反应悬液；将所述第二消化反应悬液置于70μm细胞过滤筛中过滤并在转速为1200rmin条件下离心5min得到所述外植体和第五沉淀；所述第一消化液包括：终浓度为2.0-2.2mgmL、2.2-2.4mgmL或2.4-2.6mgmL的胰蛋白酶、终浓度为0.7-0.9mM、0.9-1.0mM或1.0-1.2mM的EDTA；所述第一消化反应的温度为：25-26℃、26-27℃或27-28℃；所述第一消化反应的时间为：18-19min、19-20min或20-21min；所述第二消化液包括：终浓度为0.08-0.09mgmL、0.09-0.11mgmL或0.11-0.13mgmL胶原蛋白酶Ⅰ、终浓度为11.5-12.0μgmL、12.0-12.5μgmL或12.5-13.0μgmL的DNaseⅠ；所述第二消化反应的温度为：25-26℃、26-27℃或27-28℃；所述第二消化反应的时间为：4.5-5.0h、5.0-5.5h或5.5-6.2h；步骤C-2：通过外植体法对所述外植体进行离体培养得到豹纹鳃棘鲈皮肤组织原代色素细胞；将所述外植体置于多聚赖氨酸涂布的细胞培养瓶中进行倒置贴壁培养；所述倒置贴壁培养的温度为27.5-27.8℃、27.8-28.2℃或28.2-28.5℃；所述倒置贴壁培养的时间为4.5-4.8h、4.8-5.2h或5.2-5.5h；向倒置贴壁培养的细胞培养瓶中加入1.4-1.5mL、1.5-1.6mL或1.6-1.8mL所述原代细胞培养液进行正置贴壁培养得到所述豹纹鳃棘鲈皮肤组织原代色素细胞。

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