恭喜云南省农业科学院高山经济植物研究所郭应杰获国家专利权
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龙图腾网恭喜云南省农业科学院高山经济植物研究所申请的专利一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117044626B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-11发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311061639.6,技术领域涉及:A01H4/00;该发明授权一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法是由郭应杰;和寿星;黄杏娥;徐春莲;郭承刚;汤王外;杨文宏;曹杨;王玲;苏畅设计研发完成,并于2023-08-22向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法,涉及眼斑贝母兰组培技术领域。该方法包括选择健壮的眼斑贝母兰植株,在开花期间对其进行人工异花授粉;剪除果荚残留的杂物,洗净消毒后放到超净工作台上的无菌盘里备用;用冷却解剖刀和镊子沿着果脊解剖开,取出种子撒到初代培养基上进行暗培养,萌发后光培养;萌发的眼斑贝母兰继续生长45‑60天,当叶片开始分化时,将种苗转接到继代培养基中培养100‑120天;将无菌种苗转接至生根培养基中生根培养180‑210天;炼苗、驯化移栽。本发明克服了眼斑贝母兰传统分株繁殖缓慢,种子胚发育不全,自然条件下种子很难独立发育成完整植株等问题,同时满足了大量繁殖需求,减少野生资源的采挖,保护野生资源。
本发明授权一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法在权利要求书中公布了:1.一种眼斑贝母兰的组织培养扩繁方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1、外植体选择选择健壮的眼斑贝母兰植株,在开花期间对其进行人工异花授粉,待果荚成熟时作为外植体;步骤2、外植体消毒剪除果荚残留的杂物,用自来水清洗果荚表面,在无菌操作台上采用医用酒精与升汞进行消毒,最后放到超净工作台上的无菌盘里备用;步骤3、播种及初代培养将消毒好的果荚用冷却解剖刀和镊子沿着果脊解剖开,取出种子撒到初代培养基上进行暗培养,当种子萌发后再进行光培养;步骤4、继代增殖培养萌发的眼斑贝母兰继续生长45-60天,当叶片开始分化时,将种苗在无菌操作台上转接到继代培养基中培养100-120天;步骤5、生根壮苗培养将培养100-120天的无菌种苗转接至生根培养基中生根培养180-210天;步骤6、炼苗、驯化移栽选取生根良好且健壮的组培苗,将其移至室外环境中放置15-20天,避免强光直射使其适应外界环境;移栽时将种苗倒出洗净培养基,用稀释800-1000倍的多菌灵浸泡种苗,洗净阴干水分后将其移栽到基质中进行驯化;所述步骤1中外植体选择的具体方法包括:选择健壮植株,在4月中旬眼斑贝母兰开花期间对其进行人工异花授粉,精心培育6-7个月;待果荚成熟时,采摘外壳完好无裂的黄绿色果荚放置到填塞有海绵的瓶子中,在4℃的环境下保存24h;所述步骤3中播种及初代培养的具体方法包括:(1)将消毒好的果荚用冷却解剖刀截头去尾后,沿着果脊解剖开3-4瓣,露出白色丝状的种子;(2)将种子撒到初代培养基上,瓶盖过火焰消毒后盖到初代培养基上,将初代培养基移至培养室进行暗培养,暗培养温度为25℃,培养时间为30-45天,种胚膨大呈绿色;随后进入光培养阶段,培养温度为22-25℃,光照强度1500lx,光照时间为8小时天,初代培养基为:MS+1mgLNAA+0.25mgL6-BA+1gL酸水解酪蛋白+1gL活性炭+30gL白砂糖+3gL琼脂粉,PH调至5.8-6.0;所述步骤4中继代增殖培养的具体方法包括:萌发的眼斑贝母兰种苗生长45-60天,叶片开始分化,将种苗在无菌操作台上转接到继代培养基中培养100-120天,培养温度为22-25℃,光照强度为1500lx,光照时间为8h天,继代增殖培养基为:12MS+0.25mgLNAA+1.0mgL6-BA+1gL酸水解酪蛋白,培养基琼脂量为4gL,PH调至5.8-6.0;所述步骤5中生根壮苗培养所用的培养基为:12MS+1mgLNAA+1.5mgLIBA+1gL酸水解酪蛋白+50gL香蕉+50gL马铃薯+1gL酸水解酪蛋白+1gL活性炭+30gL白砂糖,培养基琼脂量为4gL;培养条件为:培养温度为25-28℃,光照时间为10-12hd,光照强度为1500lx,培养阶段可进行多次分苗转接培养,避免种苗生长空间狭小影响其生长。
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