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龙图腾网恭喜湖南大地同年生物科技有限公司申请的专利一种痕量核酸文库构建方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN113897414B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-11发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202111179328.0，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权一种痕量核酸文库构建方法是由王永利;贺田芬;鞠巍;汤链;徐根明;郭杰安设计研发完成，并于2021-10-11向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种痕量核酸文库构建方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种痕量核酸文库构建方法。包括以下步骤：1获取碎片化的，且经过5’端磷酸化和3’端羟基化处理的DNA单链或者cDNA；2步骤1得到的DNA片段进行3’端辅助连接，延伸成DNA双链；3步骤2得到的DNA双链的5’端连接上接头，然后进行双模板底物扩增获得文库。本发明提高了制备痕量文库的效率，并且减少了纯化步骤，对痕量的DNA起始原料构建文库意义重大。

本发明授权一种痕量核酸文库构建方法在权利要求书中公布了：1.一种痕量核酸文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1获取碎片化的，且经过5’端磷酸化和3’端羟基化处理的DNA单链或者cDNA；2步骤1得到的DNA片段进行3’端辅助连接，延伸成DNA双链；3步骤2得到的DNA双链的5’端连接上接头，然后进行双模板底物扩增获得文库；步骤2的过程采用以下方式：DNA片段进行3’端辅助连接使用两种人工合成的核苷酸片段：辅助子和连接子；辅助子的3’端序列与DNA的3’端的加尾序列互补，辅助子5’端和连接子互补，连接子与DNA的3’端加尾序列通过DNA连接酶连接；辅助子和连接子的3’端需要进行封闭，以防止体系中的加尾酶对辅助子或连接子进行3’端加尾；连接子连接上去后体系中加入延伸引物，延伸引物通过退火与辅助子进行位置竞争；成功竞争到位置的延伸引物在聚合酶作用下进行DNA双链的延伸；DNA片段3’端辅助连接和延伸成DNA双链的过程包括：体系中还需要添加普通的dNTP和热启动dNTP的混合物，普通dNTP选用四种dNTP中的任一种，热启动的dNTP为选用的普通dNTP对应剩余的三种；DNA3’端辅助连接中辅助子与DNA3’端尾互补的碱基数目为4-7个；所述的连接子的长度范围10-60nt，辅助子长度范围10-60nt；加尾长度范围3-20nt；延伸引物长度范围10-60nt；DNA片段3’端辅助连接和延伸成DNA双链的过程在同一反应体系中进行，在25℃-42℃条件下反应10分钟-60分钟，利用所述的普通dNTP进行DNA片段的加尾；然后连接子和辅助子都连接上DNA片段，再在90℃-100℃条件下反应2分钟-60分钟，使热启动的dNTP进入到激活工作的状态；最后在42℃-75℃条件下反应5分钟-60分钟，获得DNA片段的互补链；反应总体系中辅助子浓度为10nM-20μM；反应总体系中连接子与辅助子浓度为1：1-1：10；反应总体系中DNA片段总量范围1fmol-1nmol50μL；反应总体系中延伸引物浓度范围10nM-10μM；反应总体系中普通dNTP的浓度为2μM-2mM；反应总体系中普通dNTP浓度是每一种热启动dNTP的1倍-3倍。

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