恭喜中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所)王大伟获国家专利权
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龙图腾网恭喜中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所)申请的专利一种烟草NtMAB1基因沉默植株的制备方法及该植株的应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115838756B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202111098025.6,技术领域涉及:C12N15/84;该发明授权一种烟草NtMAB1基因沉默植株的制备方法及该植株的应用是由王大伟;夏菲;吴新儒;刘贯山设计研发完成,并于2021-09-18向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种烟草NtMAB1基因沉默植株的制备方法及该植株的应用在说明书摘要公布了:本发明属于植物生物技术领域,其公开了烟草NtMAB1基因沉默植株的制备方法及该植株的应用,所述烟草NtMAB1基因沉默植株的制备方法包括:对从NtMAB1基因外显子中扩增到序列M1Ri1和序列M1Ri2,分别将两段序列分两次连接到pUCCRNAi载体上,形成两个具有发夹结构的RNAi沉默载体,通过将这两个沉默载体与pCAMBIA1300‑35S通过酶切连接的方式构建RNAi沉默双元载体,并将该载体转化烟草,得到转基因沉默植株。相对于野生型,转基因沉默植株在打顶前各叶位处腋芽及分枝生长趋势较弱,打顶后各叶位的腋芽的生长也受到明显抑制,在实际应用中可减少或避免使用抑芽剂和进行人工抹杈,达到烟叶生产减工增效、降低农药残留等效果,具有重要的理论参考价值和应用价值。
本发明授权一种烟草NtMAB1基因沉默植株的制备方法及该植株的应用在权利要求书中公布了:1.一种烟草NtMAB1基因沉默植株在培育腋芽生长受抑制的烟草品种中的应用,所述烟草NtMAB1基因沉默植株的制备方法包括以下步骤:S1、以具有NtMAB1-S1基因外显子基因的序列为模板,设计引物通过PCR扩增得到如SEQIDNO:8所示的M1Ri1片段;对M1Ri1片段和pUCC-RNAi载体分别进行双酶切、片段纯化后进行连接,并将连接产物转化大肠杆菌感受态,挑取阳性克隆,对阳性克隆进行PCR检测并将扩增产物进行测序,从测序正确的阳性克隆中提取得到pUCC-Ri1中间载体;S2、对pUCC-Ri1载体进行双酶切和片段纯化,将纯化后pUCC-Ri1中间载体片段与双酶切纯化后的M1Ri1片段进行连接,得到pUCC-M1Ri1沉默载体,并对阳性克隆进行PCR鉴定;S3、以具有NtMAB1-S1基因外显子基因的序列为模板,设计引物,通过PCR扩增得到如SEQIDNO:11所示的M1Ri2片段;其他步骤同S1和S2,构建得到pUCC-Ri2载体和pUCC-M1Ri2沉默载体,转化感受态细胞后,对阳性克隆进行PCR鉴定;S4、对前述步骤制备得到的pUCC-M1Ri1、pUCC-M1Ri2和pCAMBIA1300-35S载体分别进行单酶切和纯化;将酶切纯化后的pUCC-M1Ri1和pUCC-M1Ri2载体片段分别与单酶切后的pCAMBIA1300-35S载体混合并连接,将连接产物转化大肠杆菌感受态,于抗性培养基上过夜培养,对阳性克隆进行PCR鉴定;阳性克隆携带的载体为NtMAB1基因的双元沉默载体;S5、将前一步构建成功的NtMAB1基因的两个双元沉默载体,pCAMBIA1300-35S-M1Ri1和pCAMBIA1300-35S-M1Ri2转化农杆菌,通过叶盘法侵染,获得烟草NtMAB1基因沉默植株。
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