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龙图腾网恭喜浙江大学申请的专利一种基于SAM与SAH精确定量的CMT3蛋白活性体外检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119000963B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-18发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411480465.1，技术领域涉及：G01N30/02；该发明授权一种基于SAM与SAH精确定量的CMT3蛋白活性体外检测方法是由陈彦培;罗自生;杨舒涵;李栋;徐艳群设计研发完成，并于2024-10-23向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于SAM与SAH精确定量的CMT3蛋白活性体外检测方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于SAM与SAH精确定量的CMT3蛋白活性体外检测方法，属于生物技术领域，步骤为：根据蛋白活性特点合成富含CHG序列的双链DNA片段底物和组蛋白肽段；构建体外甲基转移反应体系；反应体系于37℃温育以进行CMT3甲基转移活性体外实验；使用超高效液相色谱与三重四极杆串联飞行时间质谱联用正离子多反应监测模式对反应后体系中的SAM和S‑腺苷同型半胱氨酸进行精确定量，并与仅含TA底物的对照组进行对比以及精确计算，以显示CMT3蛋白的甲基转移活性。本发明提供了一种非放射性、简便快捷的实验手段，为CMT3蛋白等依赖于SAM甲基供体的一系列甲基转移酶活性的快速、准确定量方法提供了新思路。

本发明授权一种基于SAM与SAH精确定量的CMT3蛋白活性体外检测方法在权利要求书中公布了：1.一种基于SAM与SAH精确定量的CMT3蛋白活性体外检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）构建含有CMT3纯化蛋白、双链DNA底物、H3K9me2组蛋白肽段和S-腺苷-L-甲硫氨酸的体外甲基转移反应体系，双链DNA底物仅含TA碱基对照组以及富含CHG碱基实验组，H=ATG；2）将步骤1）构建的反应体系于37℃的条件下进行CMT3甲基转移体外反应；3）采用UPLC-qTOF-MSMS方法对步骤2）反应后体系中的SAM、SAH以及不同浓度梯度的SAM以及SAH标准品进行精确定量；其中，色谱条件为：反应后体系进样量为5μL；使用CSHC18色谱柱；流动相A为10mM醋酸铵与0.2%醋酸，流动相B为甲醇；进行8min的梯度洗脱，总流速为0.3mLmin，1min，2%B；5min，75%B；6min，2%B；质谱条件为：UPLC-qTOF-MSMS使用正离子MRM模式预设SAM，Precursorion=399.15，Fragmention=250.1以及SAH，Precursorion=385.13，Fragmention=136.06的质荷比信息；帘气35psi，离子源气体1和气体2均为55psi，离子源温度600℃，离子喷雾电压5500伏；4）根据步骤3）定量结果分析比对，计算体外甲基转移活性，具体为：将SAM与SAH实验组定量结果分别与对照组结果进行比对，结合显著性分析判断于对照组是否具有显著性差异p＜0.05，若存在显著性差异则根据以下公式定量计算CMT3活性： ；其中，USAM为基于SAM含量减少的活性定义，表示因CMT3活性导致单位时间内反应物SAM的减少量，单位为pmolSAMh；USAH表示基于SAH含量增加的活性定义，表示因CMT3活性导致单位时间内产物SAH的增加量，单位为pmolSAHh；c对照为对照组SAM或SAH的浓度μM；c实验为实验组SAM或SAH的浓度μM；v为反应体系总体积μL；t为反应时间。

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