中国医学科学院医学生物学研究所向虹获国家专利权
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龙图腾网获悉中国医学科学院医学生物学研究所申请的专利一种快速、灵敏狂犬病活病毒的试剂盒、检测方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118755880B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-18发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410905219.X,技术领域涉及:C12Q1/70;该发明授权一种快速、灵敏狂犬病活病毒的试剂盒、检测方法及其应用是由向虹;周健;洪超;寸怡娜;赵红玲;李桂兰;王玺;常亚军;陈瑜;钱兴丽设计研发完成,并于2024-07-08向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种快速、灵敏狂犬病活病毒的试剂盒、检测方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明属于基因检测技术领域,公开了一种快速、灵敏狂犬病活病毒的试剂盒、检测方法及其应用,所述方法以狂犬病毒N蛋白所在区域为范围设计引物、探针和标准品,特异性地检测狂犬病毒复制过程中产生的中间体cDNA的存在、从而对具有复制活性且具有传染活性的狂犬病活病毒进行定量检测。本方法可实现狂犬病活病毒快速、灵敏的检测,其最低检测限为103copies·μL‑1。相比传统检测方法操作更简便快捷,灵敏度更高,同时节省了时间和成本,非常适用于狂犬病毒活病毒的快速检测以及狂犬病毒灭活工艺后残留活病毒的检测。
本发明授权一种快速、灵敏狂犬病活病毒的试剂盒、检测方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种非诊断目的的快速、灵敏狂犬病活病毒的检测方法,其特征在于,所述方法以狂犬病毒N蛋白所在区域为范围设计引物、探针和标准品,特异性地检测狂犬病毒复制过程中产生的中间体cRNA的存在、从而对具有复制活性且具有传染活性的狂犬病活病毒进行定量检测,具体包括以下步骤:1以经梯度稀释的正、负链核酸检测标准品为模板,采用链特异性的标签qPCR引物和相应检测探针进行ssRT-qPCR扩增,以核酸检测标准品拷贝数的对数值与所得的Cp值,绘制标准曲线;2收集待检测的细胞或组织样品,提取RNA,并使用链特异性的逆转录引物将病毒RNA逆转录为cDNA;3以步骤2获得的样本cDNA为模板,按照与步骤1相同的条件进行ssRT-qPCR,得到的Cp值与所述标准曲线进行比对,对检测样品中狂犬病病毒正、负链RNA逆转录的cDNA分别进行绝对定量检测,进一步完成对狂犬病病毒特定链拷贝数的绝对定量;所述链特异性的逆转录引物包括正链cRNA逆转录引物、负链vRNA逆转录引物,其核苷酸序列分别如SEQIDNo.1、SEQIDNo.2所示;所述链特异性的标签qPCR引物包括正链cRNA链特异性的标签qPCR上游引物下游引物,负链vRNA链特异性的标签qPCR上游引物下游引物,其核苷酸序列分别如SEQIDNo.3、SEQIDNo.4、SEQIDNo.5、SEQIDNo.6所示;所述检测探针包括正链cRNA的Taqman检测探针、负链vRNA的Taqman检测探针,其核苷酸序列分别如SEQIDNo.7、SEQIDNo.8所示。
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