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龙图腾网恭喜华中农业大学申请的专利一种高灵敏度探针及其制备方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115976179B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-18发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210816308.8，技术领域涉及：C12Q1/6876；该发明授权一种高灵敏度探针及其制备方法和应用是由李峰;王红征;王玉丹;张熙设计研发完成，并于2022-07-12向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种高灵敏度探针及其制备方法和应用在说明书摘要公布了：本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一种高灵敏度探针、及其制备方法和应用。该探针为部分双链探针，其包括模板探针链和检测探针链，所述检测探针链从5’到3’端依次为待测目的序列互补配对区、连接碱基、模板探针互补配对区和标记区，所述标记区含有标记碱基；所述模板探针链从3’到5’端依次为检测探针链互补配对区和检测探针链标记区互补配对区，且所述检测探针链标记区互补配对区不含连接碱基；所述模板探针链和检测探针链形成检测探针链5’端为单链的部分双链探针。本发明所提供的探针含有多个标记，其检测灵敏度可达到放射性同位素检测水平。

本发明授权一种高灵敏度探针及其制备方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种高灵敏度探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，合成一条检测探针所述检测探针为miRGUS、miR166、yeastU6、plantU6，所述miRGUS的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，所述miR166的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示，所述yeastU6的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示，所述plantU6的核苷酸序列如SEQIDNO:5或SEQIDNO:6所示；S2，合成一条模板探针，该条探针的3’端是与检测探针3’末端互补配对的序列，5’端为一端随机序列，包含多个G、A、T，但不包含碱基C；当检测探针的核苷酸序列如SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5所示时，其模板探针的核苷酸序列为SEQIDNO:2所示；当检测探针的核苷酸序列如SEQIDNO:6所示时，其模板探针的核苷酸序列为SEQIDNO:7所示；S3，将步骤S1中合成的检测探针和步骤S2中合成的模板探针等量混合后进行退火处理，两条探针根据其3’末端碱基的互补配对形成一条部分双链的探针前体；其中，退火时的反应体系为：5μL10mM的检测探针、5μL10mM的模板探针，共计10μL，检测探针和模板探针的终浓度为5mM；退火程序为：70℃保温5min，以0.1℃s的降温速率降温到25℃，保温5min；S4，将步骤S3中得到的部分双链的探针前体在T4DNA聚合酶的作用下，以模板探针的5’碱基序列为模板，以dATP、dTTP和有生物素标记的biotin-dCTP为底物，向模板探针的5’端方向合成含有多个生物素基团的标记探针，由于底物中没有加入dGTP，检测探针的5’中连接碱基C就阻断了合成过程中向检测探针5’方向的合成，保证其5’末端的单链状态；其中，扩增体系为：T4DNA聚合酶1μL、退火的探针引物2μL、10×Buffer2.11μL、1mM的dATP1μL、1mM的dTTP1μL、1mM的biotin-dCTP1μL、ddH2O3μL，反应条件为：25℃孵育10min，37℃孵育1h。

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