南京师范大学吴丽娜获国家专利权
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龙图腾网获悉南京师范大学申请的专利一种基于RAA-CRISPRCas12a的检测三文鱼中鲑鱼甲病毒的方法和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119265364B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-21发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411785581.4,技术领域涉及:C12Q1/70;该发明授权一种基于RAA-CRISPRCas12a的检测三文鱼中鲑鱼甲病毒的方法和应用是由吴丽娜;黄和;刘佳慧;于海瑞;沈伟建;郭东升设计研发完成,并于2024-12-06向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于RAA-CRISPRCas12a的检测三文鱼中鲑鱼甲病毒的方法和应用在说明书摘要公布了:本发明涉及病毒检测技术领域,公开了一种基于RAA‑CRISPRCas12a的检测三文鱼中鲑鱼甲病毒的方法和应用,包括如下步骤:将Cas12蛋白的溶液、向导RNA的溶液、ssDNA报告探针的溶液、核糖核酸酶抑制剂、无核酸酶水和RAA反应物分散在缓冲液中,孵育,进行荧光强度检测;所述Cas12蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示。本发明方法中使用了一种具有切割活性更好的新型Cas12a蛋白酶,能成功应用于检测三文鱼中鲑鱼甲病毒。
本发明授权一种基于RAA-CRISPRCas12a的检测三文鱼中鲑鱼甲病毒的方法和应用在权利要求书中公布了:1.一种基于RAA-CRISPRCas12a的检测三文鱼中鲑鱼甲病毒试剂在制备检测三文鱼中鲑鱼甲病毒含量产品中的应用,其特征在于,包括如下步骤:将Cas12蛋白的溶液、向导RNA的溶液、ssDNA报告探针的溶液、核糖核酸酶抑制剂、无核酸酶水和RAA反应物分散在缓冲液中,孵育,进行荧光强度检测;所述Cas12蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示;所述RAA反应物的制备方法具体为:基于三文鱼中鲑鱼甲病毒总RNA序列逆转录后获得的cDNA序列,基于三文鱼中鲑鱼甲病毒获得的cDNA序列设计的RAA引物对,所述RAA引物对包括上游引物和下游引物;上游引物,浓度10μM,体积2μL;下游引物,浓度10μM,体积2μL;缓冲液A,体积25μL;无核酸酶水,体积13.5μL;cDNA序列,体积5μL;缓冲液B,体积2.5μL;将上述溶液混合于一管反应干粉中后进行反应,在反应温度39℃下反应时间30min,将上述反应完成后的溶液均分为5份。
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