恭喜苏州近岸蛋白质科技股份有限公司郑紫君获国家专利权
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龙图腾网恭喜苏州近岸蛋白质科技股份有限公司申请的专利一种通用型检测RNA甲基转移酶活性的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118667919B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-02发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411155626.X,技术领域涉及:C12Q1/48;该发明授权一种通用型检测RNA甲基转移酶活性的方法是由郑紫君;吴亚会;郑实;赵曼曼设计研发完成,并于2024-08-22向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种通用型检测RNA甲基转移酶活性的方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种通用型检测RNA甲基转移酶活性的方法。具体地,本发明公开了一种检测RNA甲基转移酶活性的方法,包括以下步骤:提供长度为15‑50nt的单链RNA分子作为反应底物;对其分别进行测试反应。将测试酶根据结果直接代入计算即可得到酶活。此外,本发明的检测方法可以简单、快速、准确地完成RNA甲基转移酶的活性检测。本发明方法的测定结果波动性小,重现性好。
本发明授权一种通用型检测RNA甲基转移酶活性的方法在权利要求书中公布了:1.一种检测RNA甲基转移酶活性的方法,其特征在于,包括以下步骤:(S1)提供长度为22nt的Cap0mRNA作为反应底物;所述Cap0mRNA为核苷酸序列如SEQIDNO.3所示的单链RNA分子;(S2)对(S1)中的RNA分子分别进行以下测试反应,所述测试反应包括在阴性测试体系、第一测试体系、第二测试体系反应,反应时间为t,其中:阴性测试体系中,不包含酶;第一测试体系中,包含RNA甲基转移酶的标准品酶;第二测试体系中,包含待检测的RNA甲基转移酶;(S3)检测所述阴性测试体系、第一测试体系、第二测试体系中的SAH的生成量,分别记为A0、A1、A2;(S4)基于针对所述SAH生成量A0、A1、A2的分析,获得待检测的RNA甲基转移酶活性的检测结果;所述阴性测试体系中SAH生成量为A0;第一测试体系中,当RNA甲基转移酶的标准品酶的酶量为C1时,SAH生成量为A1;第二测试体系中SAH生成量为A2;其中,A0表示质控值,即阴性测试体系中SAH生成量;A1表示酶量为C1时RNA甲基转移酶的标准品酶的SAH生成量;A2表示待检测RNA甲基转移酶的SAH生成量;如果A0=0,则认为测试体系正常;A0>0,则认为测试失败;如果以标准品酶的酶量为横坐标,SAH生成量为纵坐标绘制标准曲线,同时将纵坐标截距校准为0,得到标准曲线y=ax,R2≥0.99,则认为标准曲线绘制成功;如果A2>0,则认为待检测的RNA甲基转移酶有酶活性,活性=A2a;如果A2=0,则认为待检测的RNA甲基转移酶无活性;所述的检测结果为定量结果;所述阴性测试体系与第一测试体系中的其他反应条件完全相同,区别仅在于所述第一测试体系中包含RNA甲基转移酶的标准品酶;所述第一测试体系与第二测试体系中的其他反应条件完全相同,区别仅在于所述第二测试体系中包含待检测的RNA甲基转移酶;并且,在阴性测试体系、第一测试体系、第二测试体系中,各自独立地包含SAM、10×加帽反应缓冲液和RNase抑制剂;所述RNA的终浓度各自独立地为150μg500μl-350μg500μl;所述SAM的终浓度为0.5mM-1.0mM,所述RNase抑制剂的终浓度为0.5Uμl-2Uμl;所述RNA甲基转移酶标准品酶的终浓度为0.1Uμl-0.5Uμl;所述待检测的RNA甲基转移酶的终浓度为0.05mgml-0.2mgml;(S1)中,还包括:(S1.1)提供一目的基因的DNA;(S1.2)体外转录(S1.1)中的DNA,获得由所述DNA转录的mRNA;(S1.3)DNA转录的mRNA,获得加帽的Cap0mRNA。
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