恭喜南京工业大学郝宁获国家专利权
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龙图腾网恭喜南京工业大学申请的专利一种基于重组表达提高纳豆激酶产量的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117947007B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-09发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311508829.8,技术领域涉及:C12N9/54;该发明授权一种基于重组表达提高纳豆激酶产量的方法是由郝宁;段雅玲;郭格格;李涛;刘兆星设计研发完成,并于2023-11-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于重组表达提高纳豆激酶产量的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于重组表达提高纳豆激酶产量的方法,通过构建表达质粒pMA5‑NK,将其转化到枯草芽孢杆菌WB800中,得到重组枯草芽孢杆菌菌株。将基因工程菌接种至种子培养基中进行种子活化,种子培养基包括如下组分:蛋白胨10~15gL,酵母提取物20~25gL,K2HPO41~5gL,KH2PO41~5gL,甘油4~8gL,pH值为6.0~8.0;将活化后的种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养,得到发酵菌液,发酵培养基包括如下组分:乳糖10~15gL,糖蜜10~15gL,豆粕粉10~15gL,蛋白胨10~15gL,K2HPO41~2gL,KH2PO41~2gL,MgSO40.5~1gL,CaCl20.2~1gL,ZnSO40.01~0.05gL,pH值为pH值为6.0~8.0。本发明通过发酵后期添加氨基酸和食品级吐温‑80,使纳豆激酶的产酶量达到9763.8IUmL,为纳豆激酶的生产的提供了新方法,具有广阔应用前景。
本发明授权一种基于重组表达提高纳豆激酶产量的方法在权利要求书中公布了:1.一种基于重组表达提高纳豆激酶产量的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)、将纳豆激酶基因以含有强启动子PHpaII的pMA5为载体,重组转化到枯草芽孢杆菌感受态细胞中获得重组纳豆激酶枯草芽孢杆菌;2)、将重组纳豆激酶枯草芽孢杆菌接种至种子培养基中进行种子活化;3)、将活化后的种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养,得到含有纳豆激酶的发酵液;步骤1)所述纳豆激酶基因来源于枯草芽孢杆菌CGMCCNo.13932,核苷酸序列如SEQIDNO.1所示;步骤1)所述重组转化到枯草芽孢杆菌感受态细胞为重组转化到枯草芽孢杆菌感受态细胞WB800中获得重组纳豆激酶枯草芽孢杆菌B.subtilisWB800pMA5-NK基因工程菌;步骤3)中,菌株以2.5~15%的接种量接入所述发酵培养基中,培养温度为28~40℃,搅拌速度为200~800rpm,通气量为0.8~1.8vvm,发酵培养时间为18~48h;在发酵起始后12~24h期间,向培养基中添加氨基酸和食品级吐温-80;所述的氨基酸为亮氨酸0.2~2gL,或甘氨酸0.2~2gL,或天冬氨酸0.2~2gL,或精氨酸0.2~2gL;食品级吐温-80的添加量为0.02~0.2gL。
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