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龙图腾网恭喜健颐生物科技发展(山东)有限公司申请的专利通用型CEA-CART细胞制剂的制备方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119331918B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-13发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411895652.6，技术领域涉及：C12N15/867；该发明授权通用型CEA-CART细胞制剂的制备方法是由王清路;蒋永强;张璟设计研发完成，并于2024-12-23向国家知识产权局提交的专利申请。

本通用型CEA-CART细胞制剂的制备方法在说明书摘要公布了：本发明属于遗传工程技术领域，具体涉及一种通用型CEA‑CART细胞制剂的制备方法。RFX5基因CRISPRCas9敲除载体的构建，Tapbp基因CRISPRCas9敲除载体的构建，MICA基因CRISPRCas9敲除载体的构建，通用型iPS细胞的构建，通用型iPS细胞诱导成通用型T细胞，CEA‑CAR慢病毒的构建，通用型CEA‑CART细胞的构建。本发明提升了T细胞杀灭高表达CEA蛋白肿瘤细胞的能力且降低了免疫排异，细胞能做到储存后随取随用，可以用于肿瘤及其他疾病的防治，并能为类似新型细胞的开发提供参考。

本发明授权通用型CEA-CART细胞制剂的制备方法在权利要求书中公布了：1.一种通用型CEA-CART细胞制剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）RFX5基因CRISPRCas9敲除载体的构建：设计gRNA序列，gRNA序列为SEQIDNO.1，然后将gRNA序列克隆进表达载体，获得pU6gRNA-Cas9-GFP-RFX5敲除载体；（2）Tapbp基因CRISPRCas9敲除载体的构建：设计gRNA序列，gRNA序列为SEQIDNO.2，然后将gRNA序列克隆进表达载体，获得pU6gRNA-Cas9-GFP-Tapbp敲除载体；（3）MICA基因CRISPRCas9敲除载体的构建：设计gRNA序列，gRNA序列为SEQIDNO.3，然后将gRNA序列克隆进表达载体，获得pU6gRNA-Cas9-GFP-MICA敲除载体；（4）通用型iPS细胞的构建：将pU6gRNA-Cas9-GFP-RFX5敲除载体转染人iPS细胞，得到RFX5基因缺陷型人iPS细胞；将pU6gRNA-Cas9-GFP-Tapbp敲除载体转染RFX5基因缺陷型人iPS细胞，得到RFX5和Tapbp基因缺陷型人iPS细胞；将pU6gRNA-Cas9-GFP-MICA敲除载体转染RFX5和Tapbp基因缺陷型人iPS细胞，得到通用型iPS细胞；（5）通用型iPS细胞诱导成通用型T细胞：通用型iPS细胞中添加诱导剂诱导成通用型T细胞；（6）CEA-CAR慢病毒的构建：将CEA-CAR嵌合序列克隆进pMD18-T载体，得到pMD18-T-CAR载体；基于pMD18-T-CAR载体构建pSin-EF2-Pur-CAR载体，将pSin-EF2-Pur-CAR载体、psPAX2质粒和pMD2.G质粒混匀后转染293T细胞，得到CEA-CAR慢病毒；（7）通用型CEA-CART细胞的构建：CEA-CAR慢病毒感染通用型T细胞，筛选获得通用型CEA-CART细胞，通用型CEA-CART细胞经扩大培养后得到通用型CEA-CART细胞制剂；步骤（5）中诱导剂包括bFGF、VEGF、胰岛素-转铁蛋白-硒、L-抗坏血酸2-磷酸盐倍半镁盐水合物、1-硫代甘油、BMP4、SCF、TPO、rhIL-7和rhFLT-3L；步骤（5）中通用型iPS细胞中添加诱导剂诱导成通用型T细胞的步骤如下：（a）将通用型iPS细胞进行培养，在通用型iPS细胞培养第2天，向培养基中加入bFGF、VEGF、胰岛素-转铁蛋白-硒、L-抗坏血酸2-磷酸盐倍半镁盐水合物、1-硫代甘油和BMP4，继续培养；（b）在通用型iPS细胞培养第5天去除BMP4，向培养基中加入SCF，继续培养；（c）在通用型iPS细胞培养第7天，向培养基中加入rhFLT-3L和TPO，继续培养；（d）在通用型iPS细胞培养第14天，通用型iPS细胞分化形成造血祖细胞，收集造血祖细胞，将造血祖细胞与OP9-DL1细胞在含有rhIL-7和rhFLT-3L的OP9细胞培养基中共培养，收集T细胞，采用CD3抗体激活T细胞，得到通用型T细胞；步骤（6）中CEA-CAR嵌合序列为SEQIDNO.4。

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