福建农林大学顾连峰获国家专利权
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龙图腾网获悉福建农林大学申请的专利竹花叶病毒介导的外源表达系统及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116042701B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-13发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310105479.4,技术领域涉及:C12N15/83;该发明授权竹花叶病毒介导的外源表达系统及其应用是由顾连峰;王柏杰;包明川;金炎冬;张航晓;赵良真设计研发完成,并于2023-02-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本竹花叶病毒介导的外源表达系统及其应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种竹花叶病毒介导的外源表达系统及其应用,属于基因工程技术领域。所述外源基因表达系统的元件包括竹花叶病毒基因组、pCAMBIA1302线性化载体、ORF5亚基因组启动子、RNA沉默抑制子P19、T2A自剪切肽、外源基因和农杆菌GV3101。该过表达体系能够被应用于毛竹和麻竹基因功能研究,可为竹类分子育种提供科学指导。
本发明授权竹花叶病毒介导的外源表达系统及其应用在权利要求书中公布了:1.一种竹花叶病毒介导的外源基因表达系统,其特征在于:所述外源基因表达系统的元件包括竹花叶病毒基因组、pCAMBIA1302线性化载体、ORF5亚基因组启动子、RNA沉默抑制子P19、T2A自剪切肽、外源基因和农杆菌GV3101; 所述外源基因表达系统的构建方法包括以下步骤: 1)提取受竹花叶病毒侵染的麻竹总RNA,对提取的总RNA进行反转录得到cDNA,以反转录得到的cDNA为模板PCR扩增获得竹花叶病毒的全长基因组序列; 2)采用限制性内切酶XhoⅠ和SpeⅠ双酶切pCAMBIA1302载体,获得pCAMBIA1302线性化载体,将2×35s启动子驱动的竹花叶病毒的全长基因组序列与pCAMBIA1302线性化载体连接,得到pCAMBIA1302-BaMV载体; 3)将ORF5亚基因组启动子序列插入到pCAMBIA1302-BaMV载体的ORF4和ORF5序列之间,再将RNA沉默抑制子P19序列和T2A自剪切肽序列依次连接并克隆到pCAMBIA1302-BaMV载体的SacⅠ酶切点,得到重组病毒载体; 4)将外源基因与步骤3)获得的重组病毒载体连接,再转入农杆菌GV3101感受态细胞中,得到竹花叶病毒介导的外源基因表达系统;RNA沉默抑制子P19、T2A自剪切肽、外源基因依次位于重组病毒载体的ORF4和ORF5之间; 所述竹花叶病毒的全长基因组的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示,所述ORF5亚基因组启动子的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示,所述RNA沉默抑制子P19的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示,所述T2A自剪切肽的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示; 所述外源基因包括EGFP基因或RUBY基因。
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