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龙图腾网恭喜广东永顺生物制药股份有限公司;华南农业大学申请的专利一种鳜鱼脑细胞克隆细胞株的构建方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115948335B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-13发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211064673.4，技术领域涉及：C12N5/079；该发明授权一种鳜鱼脑细胞克隆细胞株的构建方法是由穆光慧;陈坚;张东卓;魏京广;江梦雅;涂玉蓉;秦启伟;林德锐;杨傲冰;赖月辉设计研发完成，并于2022-09-01向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种鳜鱼脑细胞克隆细胞株的构建方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种鳜鱼脑细胞克隆细胞株的构建方法。本发明利用M199培养基对翘嘴鳜脑组织进行原代培养，若干次传代后成功构建了鳜鱼脑传代细胞系，然后使用L15克隆营养液进行稀释培养，稀释培养后各孔单细胞培养成细胞群落后进行传代培养，传代过程均能维持良好的生长状态，细胞形态基本一致。经单细胞克隆后筛选得到的鳜脑克隆传代细胞株可传代50代以上，原始细胞库、基础细胞库和工作细胞库冻存的细胞经复苏均可正常传代。而且构建得到鳜脑克隆传代细胞株对SGIV、SKIV、LMBV、ISKNV、MSRV等多种水产病毒敏感，可以为水产病毒的分离、鉴定、培养和疫苗研究提供较好的细胞平台。而且本构建方法简便，重复性高。

本发明授权一种鳜鱼脑细胞克隆细胞株的构建方法在权利要求书中公布了：1.一种鳜脑克隆传代细胞株的构建方法，包括以下步骤： 1）原代培养：取鲜活鳜鱼，取脑组织分散成组织块，使用消化液消化组织块后添加M199营养液进行培养； 2）传代培养：待原代细胞长成单层后，加入消化液进行消化，然后加入M199营养液，使细胞分散悬浮，进行传代，继续培养至长成单层； 3）单细胞克隆： S1稀释培养：选取长成单层的细胞，加入消化液进行消化，离心弃上清，使用L15克隆营养液重悬后稀释培养； S2细胞传代：细胞长成单层后，加入消化液进行消化，然后加入L15克隆营养液，使细胞分散悬浮，进行传代培养； 所述L15克隆营养液包含：10~30vv%胎牛血清、10~15vv%M199细胞生长液、10~15vv%L15细胞生长液和40~70vv%L15培养基； 其中所述M199细胞生长液制备方法为：使用M199营养液重悬步骤S1中消化后的细胞，形成70~90%汇合层后收集上清培养液； 所述L15细胞生长液制备方法：使用L15营养液重悬步骤S1中消化后的细胞，形成70~90%汇合层后收集上清培养液； 所述M199营养液为含有10~20vv%胎牛血清的M199培养基； 所述L15营养液为含有10~20vv%胎牛血清的L15培养基。

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