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龙图腾网获悉东南大学申请的专利一种神经元核内包涵体病汗腺胆碱能神经定量检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119395015B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-17发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411596651.1，技术领域涉及：G01N21/84；该发明授权一种神经元核内包涵体病汗腺胆碱能神经定量检测方法是由张志珺;韩依航;吴迪;王燕娟;陆云南设计研发完成，并于2024-11-11向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种神经元核内包涵体病汗腺胆碱能神经定量检测方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种神经元核内包涵体病汗腺胆碱能神经定量检测方法；属于生物科学技术领域，其操作步骤如下：皮肤活检；免疫组织化学染色；玻片扫描；计算胆碱能神经纤维密度。本发明所述的是一种定量评估神经元核内包涵体病胆碱能神经纤维的简单易行的方法；对神经元核内包涵体病和无神经系统疾病的对照受体进行皮肤活检，切片后使用VIP抗体进行免疫荧光染色，使用ImageJ软件定量计算其真皮内汗腺VIP抗体标记的胆碱能神经纤维密度，分析其在两组受体是否存在差异，评估胆碱能神经神经损伤及严重程度；本发明为准确评估神经元核内包涵体病自主神经损伤及严重程度提供一条新途径。

本发明授权一种神经元核内包涵体病汗腺胆碱能神经定量检测方法在权利要求书中公布了：1.一种神经元核内包涵体病汗腺胆碱能神经定量检测方法，其特征在于，其操作步骤如下： 1：皮肤活检，其步骤如下： a.纳入匹配的神经元核内包涵体病和无神经系统疾病的对照受体； b.应用2％利多卡因局部麻醉后，使用皮肤活检针在前臂外侧腕上10cm取材；所述取材的皮肤的直径为3mm； c.所取标本浸泡于4％多聚甲醛过夜，25％蔗糖溶液脱水，然后包埋于OCT包埋剂； 2：免疫组织化学染色；其步骤如下： a.使用冷冻切片机对皮肤样本不连续切片； b.将切片与相应的一抗孵育过夜； c.使用二抗孵育切片； d.加入标记细胞核的DAPI； 3：玻片扫描；其步骤如下： a.使用共聚焦显微镜采集三维数字图像，根据DAPI和PGP9.5的染色识别汗腺； b.根据对照组玻片中一抗染色的信号强度与噪声的最佳比值设定扫描参数，将上述参数应用于所有扫描玻片； 4：计算胆碱能神经纤维密度；其步骤如下： a.使用ImageJ软件根据DAPI、PGP9.5和VIP3种抗体染色的合并图像手动圈画汗腺感兴趣区； b.将PGP9.5抗体和VIP抗体染色的原始荧光图像分别转换为灰度图像； c.将灰度图像去除背景得到基础图像，基础图像模糊处理后得到离焦图像，从基础图像中减去离焦图像，得到复合图像； d.将PGP9.5和VIP抗体标记的两张复合图像取交集，并分别调整光阈值以突出显示神经纤维，得到实际的VIP抗体标记的胆碱能神经纤维； e.计算实际的VIP抗体标记的胆碱能神经纤维面积除以步骤a中汗腺感兴趣区面积，即汗腺VIP抗体标记的胆碱能神经纤维密度； d.计算每位受体3个汗腺的胆碱能神经纤维密度平均值即每位受体的真皮内汗腺胆碱能神经纤维密度； 其中，所述一抗包括标记有髓和无髓神经纤维的小鼠PGP9.5抗体和标记汗腺胆碱能纤维的兔VIP抗体； 所述二抗包括抗兔AlexaFluor594抗体和抗小鼠AlexaFluor488抗体。

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