买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：唐春艳;陈素云

摘要：本发明公开了一种米槠组织培养的快速繁殖方法，包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3‑4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根。本发明缩短了米槠的育苗周期，节省育苗材料，克服了传统育苗方法中存在的育苗所需材料多、周期长等问题，大大降低了生产成本，提高了生产效率，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

主权项：一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3‑4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：（1）外植体选择：采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10‑15 min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度 0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间15‑20 min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5‑3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30‑35 d，初始芽萌发、生长；（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35‑40 d转接一次，循环往复，经3‑4个周期的培养，形成丛生芽；（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4‑5颗芽丛，插入壮芽培养基中，培养35‑40 d，形成壮芽；（6）生根培养：将步骤（5）得到的高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽。

全文数据：米槠组织培养的快速繁殖方法技术领域[0001]本发明属于植物繁殖技术领域，涉及一种米槠组织培养的快速繁殖方法。背景技术[^习米储似伽卿也⑽“必版—他厂^壳斗科锥属^木^可达如米芽小，叶披针形，叶全缘，或兼有少数浅裂齿，嫩叶叶背有红褐色或棕黄色稍紧贴的细片状蜡鳞层，成长叶呈银灰色或多少带灰白色;雄圆锥花序近顶生，花序轴无毛或近无毛，果序无毛，壳斗近圆球形或阔卵形，坚果近圆球形或阔圆锥形，熟透时无毛，果脐位于坚果底部。3一y开花，次年9-11月结果成熟。产中国长江以南各地。生于山地或丘陵常绿或落叶阔叶混交林中。喜雨量充沛和温暖气候，能耐荫，喜深厚、温润之中性和酸性土，亦耐干旱和贫瘠。既是优良的用材树种，又是培育食用菌的优良原料，培肥土壤、涵养水源能力都比较强。米槠树形高大、美观，叶椭圆或长圆形。早期生长迅速，适应能力强，抗风力强，又耐烟尘、抗污染并能杀菌。在庭院观赏及营造防火林带中有着广阔的应用前景和发展潜力。组织培养能通过无性繁殖，遗传树种的优良特性，能在短时间内快速繁殖获得大量优质的组培苗，为优质种源推广提供可能。发明内容[0003]本发明的目的是针对米槠组织培养过程中芽增殖系数低，生长缓慢等问题，提供一种生长效果好、扩繁快的米槠嫩枝组培繁殖方法。[0004]为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：一种米槠组织培养的快速繁殖方法，包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3-4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高多2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：1外植体选择:米集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；2外植体处理:将外植体置于自来水下冲洗10-15min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间15-20min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；3初始芽诱导培养:将步骤2得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30-35d，初始牙明发、生长；4增殖培养:将高多lcm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35-4〇d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽；5壮芽培养:将步骤4得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽丛，插入壮芽培养基中，培养35-40d，形成壮芽；⑹生根培养:将步骤⑸得到的高2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根;余下小芽丛再次接种于步骤4的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤5，循环往复，获得大量壮芽。[0005]以上所述的初始芽诱导培养基的配方为：12改良MS培养基+6_BA4.0-6.0mgL+IM2.0-3.0mgL+KT1.0-2.0mgL+ZT1.5-2.0mgL+VC15mgL+叶酸10mgL+VB215mg+琼脂3.0gL+卡拉胶25gL。[0006]以上所述的增殖培养基的配方为：改良12MS培养基+6-BA6_0-8.0mgL+IAA2.0-3.0mgL+ZT0.5-1.0mgL+VC15mgL+VB215mg+L-半胱氨酸20mgL+琼脂3.6gL+卡拉胶30gL。[0007]以上所述的壮芽培养基的配方为：改良MS培养基+6-BA3.0-4.0mgL+IAA1.0-1.5mgL+VC15mgL+VB215mg+L-半胱氨酸20mgL+琼脂3.5gL+卡拉胶25gL。[0008]以上所述的生根培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA1.5-2.5mgL+IAA1.0-1.5mgL+琼脂3.5gL+卡拉胶30gL。[0009]以上所述的改良MS培养基的配方为：KN03890mg•L_1;NH4N〇3850mg•L1;CaCl2•2H2〇196mg•L_1；MgS〇4•7H2〇370mg•L_1；CaN032•4H20720rag•L_1；KH2P〇4280mg•L—^MnSCk•H2O22.3mg•L—^ZnSCU•7H2〇8.6mg•L_1;CuS〇4•5H2〇0.025mg•L—SH3BO36.2mg•L_1;Na2Mo〇4•2H200.025mg•L^KI0.83mg•L'CoCh•6H2O0.025mg•L_1;维生素Bi1.0mg•L_1;维生素Be0.5mg•L—S烟酸0.5mg•L—、甘氨酸2_0mg•L—S肌醇90mg•L—工。[0010]以上步骤3所述的初始芽诱导培养的培育控制条件为：光培养、光照500-1000lx，培养温度20±1°C;步骤4所述的增殖培养、步骤5所述的壮芽培养、步骤6所述的生根培养的培育控制条件均为:光培养，光照2500-4000lx，每日光照16h，培养温度25-28r。[0011]相对于现有技术，本发明具有的优点和有益效果如下：1、本发明以米槠当年生嫩枝作为外植体，经过初始芽培养基培养，初始芽萌动率90%以上;经过3_4个周期增殖培养，形成丛生芽，芽增殖系数530d_730d，再将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高多2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，从而缩短了米槠的育苗周期，节省育苗材料，克服了传统育苗方法中存在的育苗所需材料多、周期长等问题，大大降低了生产成本，提高了生产效率。[0012]2、本发明将高多2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，余下小芽丛继续增殖培养，使得材料能够多次继代，实现大量增殖，规模化生产壮芽，实现黄樟油素型樟树的扩繁。[0013]3、本发明对MS基本培养基进行了改良，同时重点调整了与米槠出芽壮芽相关元素，使得培养基更科学，更有针对性，更易促使米槠芽诱导的发生、增殖和壮芽，效果显著。[0014]4、本发明操作过程简便，培养周期短，继代芽产量大，并且质量优，增殖系数达到5以上的组培苗产业化技术要求，具有很好的经济效益、生态效益和社会效益。具体实施方式[0015]下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。[0016]实施例1:1外植体选择:采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；2外植体处理:将外植体置于自来水下冲洗10min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间15min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；3初始芽诱导培养:将步骤2得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，置于光培养、光照500lx，培养温度20±1°C的环境中培养30-35d，初始芽萌发、生长;所述的初始芽诱导培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA4.0mgL+IM2.0mgL+KT1.0mgL+H1.5mgL+VC15mgL+叶酸10mgL+VB215mg+琼脂3.0gL+卡拉胶25gL;4增殖培养:将高多Ion的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，置于光培养，光照2500lx，每日光照16h，培养温度25-28°C的环境中，35-40d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽;所述的增殖培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA6.0mgL+IAA2.0mgL+n0.5mgL+VC15mgL+VB215mg+L-半胱氨酸20mgL+琼脂3.6gL+卡拉胶30gL;⑸壮芽培养:将步骤⑷得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽丛，插入壮芽培养基中，置于光培养，光照2500lx，每日光照16h，培养温度25-28°C的环境中培养35-40d，形成壮芽;所述的壮芽培养基的配方为:改良MS培养基+6-BA3.0mgL+IAA1_0mgL+VC15mgL+VB215mg+L-半胱氨酸20mgL+琼脂3.5gL+卡拉胶25gL;6生根培养:将步骤5得到的高多2cm的单芽插入生根培养基中，余下小芽丛再次接种于步骤4的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤5，循环往复，获得大量壮芽;生根培养是置于光培养，光照2500lx，每日光照16h，培养温度25-28°C的环境中诱导生根，生根率为89%;所述的生根培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA1.5mgL+IAA1.0mgL+琼脂3.5gL+卡拉胶30gL。[0017]以上所述改良MS培养基的配方为:KN〇3890mg•L—SNH4N03850mg•L—SCaCh•2H20196mg•L—•7H2〇370mg•L_1;CaN032•4H20720mg•L—SKH2PO4280mg•L_1;MnS〇4•H2O22.3mg•L—SZnSf^•7H2〇8.6mg•L—SCuSCk•5H2〇0.025mg•L_1;H3BO36.2mg•L_1；Na2Mo〇4•2H200.025mg•L^；KI0.83mg•L^；CoC12•6H2O0.025mg.L_1;维生素出1.0mg.L—1;维生素B60.5mg.L—1;烟酸0.5mg*L—1;甘氨酸2.0mg•r1;肌醇90mg•L-1。[0018]实施例2:1外植体选择:采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；2外植体处理:将外植体置于自来水下冲洗15min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间20min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；3初始芽诱导培养:将步骤2得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，置于光培养、光照1000lx，培养温度20±1°C的环境中培养30-35d，初始芽萌发、生长;所述的初始芽诱导培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA5.0mgL+IAA3.0mgL+KT1.5mgL+ZT1.5mgL+VC15mgL+叶酸10mgL+VB215mg+琼脂3.0gL+卡拉胶25gL;4增殖培养:将高1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，置于光培养，光照3000lx，每日光照16h，培养温度25-28°C的环境中，35_40d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽;所述的增殖培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA7_0mgL+IAA2.5mgL+ZT1.0mgL+VC15mgL+VB215mg+L-半胱氨酸20mgL+琼脂3_6gL+卡拉胶30gL;5壮芽培养:将步骤4得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽丛，插入壮芽培养基中，置于光培养，光照3000lx，每日光照16h，培养温度25-28°C的环境中培养35-40d，形成壮芽;所述的壮芽培养基的配方为:改良MS培养基+6-BA3.5mgL+IAA1.0mgL+VC15mgL+VB215mg+L-半胱氨酸20mgL+琼脂3.5gL+卡拉胶25gL;6生根培养:将步骤5得到的高多2cm的单芽插入生根培养基中，余下小芽丛再次接种于步骤4的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤5，循环往复，获得大量壮芽;生根培养是置于光培养，光照3000lx，每日光照16h，培养温度25-28°C的环境中诱导生根，生根率为92%;所述的生根培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA2_0mgL+IAA1.5mgL+琼脂3.5gL+卡拉胶30gL。[0019]以上所述改良MS培养基的配方为:KN〇3890mg•L—SNftNOs850mg•L—SCaCh•2H20196mg•L_1;MgS〇4•7H20370mg•L_1;CaN032•4H20720mg•L_1;KH2P〇4280mg•L_1；MnS04•H2〇22.3mg•L_1；ZnS〇4•7H208.6mg•L_1；CuS〇4•5H200.025mg•L'1；H3BO36.2mg•L_1;Na2Mo〇4•2H200.025mg•L—SKI0_83mg•L—^CoCk•6H2O0.025mg•L_1;维生素B!1.0mg•L_1;维生素B60.5mg•L—1;烟酸0.5mg•L—1;甘氨酸2.0mg•L—S肌醇90mg•L_1。[0020]实施例3:1外植体选择:采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；2外植体处理:将外植体置于自来水下冲洗15min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间20min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；3初始芽诱导培养:将步骤2得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，置于光培养、光照1000lx，培养温度20土TC的环境中培养30-35d，初始芽萌发、生长;所述的初始芽诱导培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA6.0mgL+IAA2.5mgL+KT2.0mgL+ZT2.0mgL+VC15mgL+叶酸10mgL+VB215mg+琼脂3.0gL+卡拉胶25gL;4增殖培养:将高多1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，置于光培养，光照4000lx，每日光照16h，培养温度25-28°C的环境中，35-40d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽;所述的增殖培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA8.0mgL+IAA3.0mgL+ZT1.0mgL+VC15mgL+VB2I5mg+L-半胱氨酸2〇mgL+琼脂3.6gL+卡拉胶30gL;⑸壮芽培养:将步骤⑷得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽丛，插入壮芽培养基中，置于光培养，光照4000lx，每日光照16h，培养温度25-28°C的环境中培养35-40d，形成壮芽;所述的壮芽培养基的配方为：改良MS培养基+6-BA4.0mgL+IM1_5mgL+VC15mgL+VB215mg+L-半胱氨酸20mgL+琼脂3.5gL+卡拉胶25gL;6生根培养:将步骤5得到的高多2cm的单芽插入生根培养基中，余下小芽丛再次接种于步骤4的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤5，循环往复，获得大量壮芽;生根培养是置于光培养，光照4000lx，每日光照16h，培养温度25_28°C的环境中诱导生根，生根率为93%;;所述的生根培养基的配方为：12改良MS培养基+6_BA2.5mgL+IAA1.5mgL+琼脂3.5gL+卡拉胶30gL。[0021]以上所述改良MS培养基的配方为:KN〇3890mg•L—SNH4NO3850mg•L+SCaCh•2H20196mg•L^；MgS04•7H20370mg•L_1；CaN〇32*4H20720mg•L_1；KH2P〇4280mg•L_1；MnS〇4*H2O22.3mg•L_1；ZnS04•7H208.6mg•rSCuS〇4•5H200.025mg•L'1；H3BO36.2mg•L^；Na2Mo〇4•2H200.025mg•L_1；KI0.83mg•L_1；CoC12•6H2O0.025mg.L—1;维生素Bi1.0mg.I1;维生素B60.5mg.L—1;烟酸0.5mg.L—1;甘氨酸2.0mg•L_1;肌醇90mg•I1。

权利要求：1.一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过3-4个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高多2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：1外植体选择:采集半木质化、生长健壮的当年生米槠嫩枝作为外植体；2外植体处理:将外植体置于自来水下冲洗10-15min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度0.3%的氯化汞溶液中，控制浸泡时间15-20min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；3初始芽诱导培养:将步骤2得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，培养30-35d，初始芽萌发、生长；4增殖培养:将高多lcm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，35-40d转接一次，循环往复，经3-4个周期的培养，形成丛生芽；5壮芽培养:将步骤4得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽丛，插入壮芽培养基中，培养35-40d，形成壮芽；6生根培养:将步骤5得到的高多2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根;余下小芽丛再次接种于步骤4的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤5，循环往复，获得大量壮芽。2.根据权利要求1所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:所述的初始芽诱导培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA4.0-6.0mgL+IAA2.0-3.0mgL+KT1_0-2.0mgL+ZT1.5-2.0mgL+VC15mgL+叶酸10mgL+VB215mg+琼脂3.0gL+卡拉胶25gL。3.根据权利要求1所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:所述的增殖培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA6.0-8.0mgL+IAA2.0-3.0mgL+ZT0.5-1.0mgL+VCI5mgL+VB2I5mg+L-半胱氨酸20mgL+琼脂3.6gL+卡拉胶30gL。4.根据权利要求1所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:所述的壮芽培养基的配方为:改良MS培养基+6-BA3.0-4.0mgL+IAA1.0-1.5mgL+VC15mgL+VB2I5mg+L-半胱氨酸2〇mgL+琼脂3.5gL+卡拉胶25gL。5.根据权利要求1所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:所述的生根培养基的配方为：12改良MS培养基+6-BA1.5-2.5mgL+IAA1.0-1.5mgL+琼脂3.5gL+卡拉胶30gL。6.根据权利要求2-5任一所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:所述的改良MS培养基的配方为：KNO3890mg•l_1;NH4N〇3850mg•L_1;CaCl2•2H2〇196mg•L—'MgSCU•7H20370mg•L_1;CaN〇32•4H2O720mg•L—SKH2PO4280mg•L—SMnSO*•H2O22.3mg•L_1；ZnS〇4•7H2〇8.6mg•rx；CuS〇4•5H200.025mg•L_1；H3B〇36.2mg•L_1;Na2Mo〇4•2H200.025mg•L—SKI0.83mg•L—SCoCl〗•6H2O0.025mg•L—1;维生素Bi1.0mg•L—1;维生素Be0.5mg•L—1;烟酸〇.5mg•L—1;甘氨酸2.0mg•L—1;肌醇90mg•L~〇7.根据权利要求1所述的一种米槠组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤3所述的初始芽诱导培养的培育控制条件为:光培养、光照500-1000lx，培养温度20±1°C;步骤4所述的增殖培养、步骤5所述的壮芽培养、步骤6所述的生根培养的培育控制条件均为:光培养，光照2500-4000lx，每日光照16h，培养温度25-28°C。

百度查询： 唐春艳 陈素云 米槠组织培养的快速繁殖方法