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申请/专利权人：南京农业大学
摘要：本发明公开了一种梨PMEI蛋白的体外表达纯化方法及其应用。通过设计引物克隆梨PMEI基因；构建大肠杆菌重组表达质粒PMEI‑pCold‑TF；将构建的重组表达质粒PMEI‑pCold‑TF转化入大肠杆菌RosettaDE3中，构建梨PMEI蛋白重组表达菌株；对重组菌株进行蛋白诱导表达，并用镍柱亲和层析法纯化重组梨PMEI蛋白；之后，用获得的重组梨PMEI蛋白处理梨花粉管及拟南芥根部。通过本发明的方法，实现了梨PMEI蛋白的首次体外表达及纯化，表达效率高，纯化蛋白稳定存在且纯度完全可以满足相关实验的需要；通过重组梨PMEI蛋白对梨花粉管和拟南芥根部的处理，促进了梨花粉管和拟南芥根部的生长。
主权项：1.一种梨PMEI蛋白体外表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：1提取梨花粉总RNA，反转录成cDNA，设计引物，以反转录生成的cDNA为模板进行PCR扩增梨PMEI基因；2构建梨PMEI蛋白的大肠杆菌原核表达重组质粒；3将步骤2中构建的重组质粒用热激法转化到大肠杆菌菌株RosettaDE3中，构建梨PMEI蛋白的原核表达重组菌株；4培养步骤3中构建的重组大肠杆菌菌株至OD600为0.4-0.6，低温处理后加入IPTG诱导梨PMEI蛋白的表达；5纯化诱导表达的梨PMEI蛋白；6重组梨PMEI蛋白的鉴定。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京农业大学 一种梨PMEI蛋白体外表达的方法及其应用
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