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申请/专利权人:中国科学院植物研究所;上海汉禾生物新材料科技有限公司
摘要:本发明提供一种里氏木霉RUT‑C30遗传转化方法,包括如下步骤:a将外源质粒与里氏木霉RUT‑C30原生质体在聚乙二醇水溶液中混合并进行冰浴10‑20min;b向混合体系中继续加入8‑10倍体积的聚乙二醇水溶液,室温下转化培养5‑6min,加入STC试剂沉淀转化后的原生质体再悬浮;c将转化后的原生质体移至木霉筛选培养基中培养5‑7天后挑取转化株,再移至木霉琼脂培养基中扩繁,获得转化株孢子悬浮液,将孢子悬浮液接种至木霉种子培养基过夜培养获得转化株菌丝。本发明将pAN7‑1潮霉素表达质粒成功转化RUT‑C30菌株,转化株阳性率23‑41%,成功建立里氏木霉RUT‑C30的遗传转化系统。
主权项:1.一种里氏木霉RUT-C30遗传转化方法,包括如下步骤:a将外源质粒与里氏木霉RUT-C30原生质体在聚乙二醇水溶液中混合并进行冰浴10-20min;b向混合体系中继续加入8-10倍体积的聚乙二醇水溶液,室温下转化培养5-6min,加入STC试剂沉淀转化后的原生质体再悬浮;c将转化后的原生质体移至木霉筛选培养基中培养5-7天后挑取转化株,再移至木霉琼脂培养基中扩繁,获得转化株孢子悬浮液,将孢子悬浮液接种至木霉种子培养基过夜培养获得转化株菌丝。
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