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申请/专利权人：长庚医疗财团法人林口长庚纪念医院;长庚大学

摘要：本发明涉及用于预测带有急性心肌梗塞的人类个体发展出急性肾损伤的风险的方法。本发明揭示一种用于预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒，其中，所述试剂盒包含用于检测miRNA的表达水平的试剂，所述miRNA选自于由下列所构成的群组：miR‑23a‑3p、miR‑24‑3p、miR‑145‑5p，以及它们的组合。本发明也揭示用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途。

主权项：1.用于特异性检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，其特征在于，所述miRNA选自于由下列所构成的群组：miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-145-5p，以及它们的组合，以及使用所述试剂盒来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的步骤包括：自带有急性心肌梗塞的人类个体获得血液样品；检测所述血液样品中的所述miRNA的表达水平；以及令所述血液样品中所检测到的miRNA的表达水平与预设标准相比较，其中若所述血液样品中所检测到的miRNA的表达水平低于所述预设标准，所述人类个体被认定为会发展出急性肾损伤。

全文数据：用于预测带有急性心肌梗塞的人类个体发展出急性肾损伤的风险的方法技术领域本发明有关于一种用于预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的方法。特别地，本发明有关于一种使用miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-145-5p中至少一者的表达水平来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的方法。背景技术急性肾损伤acutekidneyinjury,AKI主要由各种不同的重大疾病所诱发，并且会造成肾功能的快速丧失，进而引起许多的并发症complication，包括体液超载fluidoverload、电解质失衡electrolyteimbalance、代谢性酸中毒metabolicacidosis以及尿毒症uremia等。近年来由于心肾综合征cardiorenalsyndrome的观念被提出，急性冠状动脉综合征acutecoronarysyndrome,ACS[例如，急性心肌梗塞acutemyocardialinfarction,AMI]所诱发的急性肾损伤已逐渐受到重视。急性心肌梗塞是因提供心肌的血液循环中断而导致的心肌缺氧myocardialischemia以及心肌损伤myocardialinjury。已有报导指出，大约12-36％的带有急性心肌梗塞的病患会在2-7天左右发展出急性肾损伤。临床上急性肾损伤的诊断主要监测血清肌酸酐serumcreatinine水平的异常上升。然而，当病患被诊断出已发展出急性肾损伤时，通常已丧失治疗的先机。若能预测到急性肾损伤的发生风险，则可及早进行血管内容积扩充intravascularvolumeexpansion或使用血管加压剂vasopressor并且避免医源性肾毒素iatrogenicnephrotoxin。因此，本领域的相关研究人员皆致力于寻找一个可信赖的生物标记以供用于预测急性肾损伤的发生，特别是急性心肌梗塞所发展出的急性肾损伤。已有研究尝试使用血清中或尿液中的NGAL作为生物标记以供用于预测急性肾损伤的发生，然而，血清中的NGAL被发现可能会受到许多共存变量coexistingvariables的影响，包括慢性肾脏疾病chronickidneydisease、慢性高血压chronichypertension、全身性感染systemicinfections、发炎性病况inflammatoryconditions、贫血anemia、缺氧hypoxia以及恶性肿瘤malignancies。此外，NGAL被发现会于动脉粥样硬化斑atheroscleroticplaques以及腹主动脉瘤abdominalaorticaneurysms中表达，而可能会影响血清中的NGAL的测定。另一方面，尿液中的NGAL则被发现可能会受到诸如慢性肾脏疾病、IgA肾病变IgAnephropathy、狼疮性肾炎lupusnephritis以及泌尿道感染urinarytractinfection的共存变量的影响DevarajanP.etal.2010,BiomarkMed.,4:265-280。目前已有研究在探讨miRNA的表达水平与急性肾损伤之间的关联性。例如，miR-24、miR-127以及miR-494的表达水平被发现会在作为急性肾损伤模型的带有缺血-再灌注损伤ischemia-reperfusioninjury的老鼠中被提升，并且miR-127以及miR-494被预期可作为用于诊断急性肾损伤的生物标记LorenzenJ.M.etal.2014,J.Am.Soc.Nephrol.,25:2717-2719；Aguado-FraileE.etal.2012,PLoSOne,7:e44305；Yi-FanL.etal.2010,J.Am.Soc.Nephrol.,23:2012-2023。另外，miR-214的表达水平也被发现会在作为急性肾损伤模型的老鼠中被提升CuiR.etal.2016,PeerJ.,4:e1729。虽然已存在有上述的文献报导，就申请人所知，迄今尚无任何文献或专利前案曾经揭示miR-23a-3p以及miR-145-5p与急性肾损伤的关联性。经研究，申请人意外地发现，miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p可分别供应用于作为用于预测带有急性心肌梗塞的病患是否会发展出急性肾损伤的生物标记，而它们的任二者或任三者的组合能够提供更佳的诊断力。发明内容于是，在第一个方面，本发明提供一种用于预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒，其包含用于检测miRNA的表达水平的试剂，所述miRNA选自于由下列所构成的群组：miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-145-5p，以及它们的组合。本发明所述用于预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒，所述miRNA是miR-23a-3p。本发明所述用于预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒，所述miRNA是miR-24-3p。本发明所述用于预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒，所述miRNA是miR-145-5p。在第二个方面，本发明提供用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，其中，所述miRNA选自于由下列所构成的群组：miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-145-5p，以及它们的组合，以及使用所述试剂盒来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的步骤包括：自带有急性心肌梗塞的人类个体获得血液样品；检测所述血液样品中的所述miRNA的表达水平；以及令所述血液样品中所检测到的miRNA的表达水平与预设标准相比较，其中若所述血液样品中所检测到的miRNA的表达水平低于所述预设标准，所述人类个体被认定为会发展出急性肾损伤。本发明所述用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，所述miRNA是miR-23a-3p。本发明所述用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，所述miRNA是miR-24-3p。本发明所述用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，所述miRNA是miR-145-5p。在第三个方面，本发明提供用于检测至少2个miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，其中，所述至少2个miRNA选自于由下列所构成的群组：miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-145-5p，以及它们的组合，以及使用所述试剂盒来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的步骤包括：自带有急性心肌梗塞的人类个体获得血液样品；检测所述血液样品中的所述至少2个miRNA的表达水平；将所述血液样品中所检测到的至少2个miRNA的表达水平代入逻辑式回归模型来计算发展出急性肾损伤的机率；以及令所计算出的机率与预设标准相比较，其中若所计算出的机率高于所述预设标准，所述人类个体被认定为会发展出急性肾损伤。本发明所述用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，所述至少2个miRNA是miR-23a-3p以及miR-24-3p。本发明所述用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，所述逻辑式回归模型如下：logit[PrY＝1]＝13.962+0.982×A－1.987×B其中，logit[PrY＝1]表示所述人类个体将会发展出急性肾损伤的机率；A＝miR-23a-3p的表达水平Ct；以及B＝miR-24-3p的表达水平Ct。本发明所述用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，所述至少2个miRNA是miR-24-3p以及miR-145-5p。本发明所述用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，所述逻辑式回归模型如下：logit[PrY＝1]＝17.11－1.984×C+0.901×D其中，logit[PrY＝1]表示所述人类个体将会发展出急性肾损伤的机率；C＝miR-24-3p的表达水平Ct；以及D＝miR-145-5p的表达水平Ct。本发明所述用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，所述至少2个miRNA是miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p。本发明所述用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，所述逻辑式回归模型如下：logit[PrY＝1]＝17.12+0.742×E－2.558×F+0.772×G其中，logit[PrY＝1]表示所述人类个体将会发展出急性肾损伤的机率；E＝miR-23a-3p的表达水平Ct；F＝miR-24-3p的表达水平Ct；以及G＝miR-145-5p的表达水平Ct。本发明所述用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，所述血液样品被拿来进行检测之前先经过血液分离处理，以分离出血清来供检测miRNA的表达水平之用。本发明所述用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，所述miRNA的表达水平使用下列方法学的至少一者来进行检测：聚合酶链反应、实时聚合酶链反应、反转录聚合酶链反应、定量反转录聚合酶链反应、杂交、探针杂交以及基因表达阵列。具体实施方式本发明的上述以及其它目的、特征与优点，在参照以下的详细说明与较佳实施例后，将变得明显。除非另外有所定义，在本文中所使用的所有技术性与科学术语具有本领域技术人员所共同了解的意义。熟悉本技艺者会认知到许多与那些被描述于本文中者相似或等效的方法和材料，它们可被用于实施本发明。当然，本发明决不受到所描述的方法和材料的限制。为表清楚，下面的界定被使用于本文中。为了寻找可供用于预测带有急性心肌梗塞的病患是否会发展出急性肾损伤的生物标记，在被诊断带有急性心肌梗塞而入住心脏加护病房的病患中，申请人针对有发展出急性肾损伤的病患也就是AMI+AKI+组以及无发展出急性肾损伤的病患也就是AMI+AKI-组，比较他们在入住心脏加护病房起的第1天也就是在尚未发展出急性肾损伤之前的血液样品中不同miRNA的表达水平。而研究结果显示，AMI+AKI+组的miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p的表达水平显著地低于AMI+AKI-组所具者，而miR-127-3p、miR-214-3p以及miR-494-3p的表达水平则在这2组之间无呈现出显著差异。此结果意谓miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p可供作为一种用于预测带有急性心肌梗塞的病患是否会发展出急性肾损伤的生物标记。申请人进一步使用受试者操作特征ROC曲线分析[receiveroperatingcharacteristicsROCcurveanalysis]而发现到：miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p各自皆可展现良好的诊断灵敏度sensitivity及特异性specificity。于是，本发明提供一种用于预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒，其包含用于检测miRNA的表达水平的试剂，所述miRNA选自于由下列所构成的群组：miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-145-5p，以及它们的组合。在本发明的一个较佳具体例中，所述miRNA是miR-23a-3p。在本发明的另一个较佳具体例中，所述miRNA是miR-24-3p。在本发明的又另一个较佳具体例中，所述miRNA是miR-145-5p。如本文中所用的，术语“miR-23a-3p”、“miR-24-3p”以及“miR-145-5p”可分别与“hsa-miR-23a-3p”、“hsa-miR-24-3p”以及“hsa-miR-145-5p”被交换地使用。依据本发明，急性心肌梗塞可以依据公认的诊断标准diagnosiscriteria并通过本领域普通技术人员所详知且惯用的任何方法而被诊断出。较佳地，急性心肌梗塞依据在ThygesenK.etal.2007,Eur.HeartJ.,28:2528-2538中所定义的标准而被诊断。本发明也提供用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，其中，所述miRNA选自于由下列所构成的群组：miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-145-5p，以及它们的组合，以及使用所述试剂盒来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的步骤包括：自带有急性心肌梗塞的人类个体获得血液样品；检测所述血液样品中的所述miRNA的表达水平；以及令所述血液样品中所检测到的miRNA的表达水平与预设标准相比较，其中若所述血液样品中所检测到的miRNA的表达水平低于所述预设标准，所述人类个体被认定为会发展出急性肾损伤。依据本发明，所述血液样品可以在任何时间下取自于所述人类个体。在本发明的一个具体例中，所述血液样品是在上午5点至8点之间而被获得的。依据本发明，所述血液样品被拿来进行检测之前可先经过血液分离处理，以分离出血清来供检测miRNA的表达水平之用。依据本发明，所述miRNA的表达水平可通过那些熟习此技艺者所详知的方法而被测定。在此方面，可以参考，例如，ChenC.etal.2005,NucleicAcidsRes.,33:e179，以及TianT.etal.2015,Org.Biomol.Chem.,13:2226-2238。较佳地，所述miRNA的表达水平使用下列方法学的至少一者来进行检测：聚合酶链反应polymerasechainreaction,PCR、实时聚合酶链反应realtimePCR[又被称为定量聚合酶链反应quantitativePCR,q-PCR]、反转录聚合酶链反应reversetranscriptionPCR,RT-PCR、定量反转录聚合酶链反应quantitativeRT-PCR,RT-qPCR、杂交、探针杂交以及基因表达阵列。有关这些方法学的操作条件的设定以及试剂的选用落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。依据本发明，用来与所检测到的miRNA的表达水平相比较的预设标准predeterminedstandard可意指针对带有急性心肌梗塞而不会发展出急性肾损伤的人类个体的血液样品中的miRNA的表达水平的范围、数值或截断值cutoffvalue例如通过本领域普通技术人员所熟知的标准技术所测得者。如本文中所用的，术语“带有急性心肌梗塞而不会发展出急性肾损伤的人类个体”意指不处于发展出急性肾损伤的风险中的带有急性心肌梗塞的个体，也就是，所述个体在经由专业的执业医师诊断出带有急性心肌梗塞之后，被进行历时时间期间的监测例如血清肌酸酐水平的监测而被认为没有发展出急性肾损伤。较佳地，所述时间期间为7天。另外，申请人进一步组合miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p中至少两者，并通过逻辑式回归模型logisticregressionmodel来计算各组人类个体发展出急性肾损伤的机率值。实验结果显示，无论是2种或3种miRNA的组合，AMI+AKI+组所计算出的机率值皆显著地高于AMI+AKI-组所具者，并且经由ROC曲线分析所得到的AUC皆高于单一miRNA所具者。于是，本发明提供用于检测至少2个miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，其中，所述至少2个miRNA选自于由下列所构成的群组：miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-145-5p，以及它们的组合，以及使用所述试剂盒来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的步骤包括：自带有急性心肌梗塞的人类个体获得血液样品；检测所述血液样品中的所述至少2个miRNA的表达水平；将所述血液样品中所检测到的至少2个miRNA的表达水平代入逻辑式回归模型来计算发展出急性肾损伤的机率；以及令所计算出的机率与预设标准相比较，其中若所计算出的机率高于所述预设标准，所述人类个体被认定为会发展出急性肾损伤。在本发明的较佳具体例中，所述至少2个miRNA是miR-23a-3p以及miR-24-3p。而所述逻辑式回归模型如下：logit[PrY＝1]＝13.962+0.982×A－1.987×B其中，logit[PrY＝1]表示所述人类个体将会发展出急性肾损伤的机率；A＝miR-23a-3p的表达水平Ct；以及B＝miR-24-3p的表达水平Ct。在本发明的另一较佳具体例中，所述至少2个miRNA是miR-24-3p以及miR-145-5p。而所述逻辑式回归模型如下：logit[PrY＝1]＝17.11－1.984×C+0.901×D其中，logit[PrY＝1]表示所述人类个体将会发展出急性肾损伤的机率；C＝miR-24-3p的表达水平Ct；以及D＝miR-145-5p的表达水平Ct。在本发明的又另一较佳具体例中，所述至少2个miRNA是miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p。而所述逻辑式回归模型如下：logit[PrY＝1]＝17.12+0.742×E－2.558×F+0.772×G其中，logit[PrY＝1]表示所述人类个体将会发展出急性肾损伤的机率；E＝miR-23a-3p的表达水平Ct；F＝miR-24-3p的表达水平Ct；以及G＝miR-145-5p的表达水平Ct。依据本发明，所述血液样品的取样与处理以及miRNA的表达水平的测定如上面所述者。依据本发明，用来与所计算出的机率相比较的预设标准可意指针对带有急性心肌梗塞而不会发展出急性肾损伤的人类个体发展出急性肾损伤的机率的范围、数值或截断值例如通过本领域普通技术人员所熟知的标准技术所测得者。本发明将就下面的实施例来做进一步说明，但应了解的是，所述实施例仅供例示说明用，而不应被解释为本发明的实施上的限制。实验个体：参与本研究的实验个体通过使用由长庚医疗财团法人人体试验伦理委员会ChangGungMedicalFoundationInstitutionalReviewBoard所认可的操作程序而被募集。排除标准exclusioncriteria包括年龄小于20岁、带有末期肾衰竭endstagerenalfailure且接受长期透析治疗，以及住院期间小于24小时或重复住院的病患。本研究共计有49位人类个体参加，他们是在西元2009年11月至2014年12月之间于长庚纪念医院ChangGungMemorialHospital的心脏血管内科cardiovascularinternalmedicine被诊断带有急性心肌梗塞acutemyocardialinfarction,AMI而入住心脏加护病房coronarycareunit的病患。针对所有参与研究的病患都有取得他们的告知同意书informedconsent。所有病患在入住心脏加护病房起的第1天开始，血清样品被定期收集，并且依据改善全球肾病预后KidneyDiseaseImprovingGlobalOutcomes,KDIGO组织所提出的针对急性肾损伤的临床实践指南ClinicalPracticeGuidelinesforAcuteKidneyInjury，利用血清肌酸酐serumcreatinine的水平来监测是否有发展出急性肾损伤acutekidneyinjury,AKI，其中，与第1天所测得的血清肌酸酐水平相较之下，在2天内上升0.3mgdL以上或者在7天内上升1.5倍以上，即被诊断为已发展出急性肾损伤。在入住心脏加护病房的7天内，在49位病患中，有23位发展出急性肾损伤，他们在下文中被称为AMI+AKI+组，而其余的26位病患被称为AMI+AKI-组。有关AMI+AKI-组以及AMI+AKI+组病患的临床资讯clinicalinformation被显示于下面的表1中。表1.AMI+AKI-组以及AMI+AKI+组病患的临床资讯组别AMI+AKI-组AMI+AKI+组个体的数目2623年龄a59±273±2性别女性男性422419体重kga68.9±2.665.3±2.3血清肌酸酐水平mgdLab0.9±0.13.4±0.5a：平均值±标准偏差standarddeviation,S.D.b：以入住心脏加护病房起的7天内的最高值计一般实验方法：1.血清样品的制备：将由病患所采集的血液在4℃下以2,000rpm予以离心历时10分钟并收集上清液，由此所得到的血清样品被冷冻保存于-80℃下备用。2.统计学分析statisticalanalysis：在下面的实施例中，所有的统计学分析使用IBMSPSSStatistics22SPSSInc.,IL,USA而被执行。各组之间的差异性通过非参数曼-怀特尼U检验nonparametricMann-WhitneyUtest来作评估，若所得到的统计比较结果p＜0.05，代表有统计学显著性statisticalsignificance。实施例1.血清中的miRNA的表达水平与带有急性心肌梗塞的病患发展出急性肾损伤的关联性评估A.单一miRNA的表达水平的关联性评估：在本实验中，AMI+AKI-组以及AMI+AKI+组病患在入住心脏加护病房起的第1天也就是在尚未发展出急性肾损伤之前的血清中的miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-127-3p、miR-145-5p、miR-214-3p以及miR-494-3p的表达水平被测定，以评估这些miRNA的表达水平是否能被用来预测急性肾损伤的发展。首先，将各组病患在入住心脏加护病房起的第1天的血清样品以12,000rpm予以离心历时5分钟以移除细胞残渣。接着，对所得到的上清液取250μL并混合以1,000μL的QIAZol溶解试剂QIAZolLysisReagentQiagen以及被用来作为掺入对照组spike-incontrol的107个拷贝数的合成的cel-miR-39-3pIDT,Coralville,IA，继而使用miRNeasy迷你试剂盒miRNeasyMiniKitQiagen并依据制造商的操作指南来进行总RNAstotalRNAs的萃取。之后，使用Quant-iTTMRNA分析Quant-iTTMRNAAssayInvitrogen以及NanoDrop3300荧光分光光度计NanoDrop3300FluorospectrophotometerThermoScientific,DE,USA并依据制造商的操作指南来进行总RNAs浓度的测定。对由此所得到的总RNAs取5.4μL，然后加入40URNaseout、1XPCR缓冲液以及2.5mMMgCl2并予以混合均匀，继而对所形成的混合物加入0.5U肝素酶IheparinaseISigma-Aldrich,MO,USA，继而于25℃下作用历时1小时以移除肝素heparin的干扰。接着，使用miRNA反转录试剂盒miRNAReverseTranscriptionKit以及MicroRNA分析MicroRNAAssaysAppliedBiosystems,CA,USA并且依据制造商所提供的操作指引来进行反转录反应reversetranscriptionreaction以合成第一链cDNAfirst-strandcDNA。接着，以所得到的第一链cDNA作为模版template，使用MicroRNA分析以及QuantStudioTM12Kflex实时PCR系统QuantStudioTM12Kflexreal-timePCRsystemAppliedBiosystems,CA,USA并且依据制造商所提供的操作指引来进行定量聚合酶链反应quantitativePCR,q-PCR，而有关q-PCR的反应条件与针对各个miRNA所使用的MicroRNAAssayMix分别被显示于下面的表2与表3中。表2.q-PCR的反应条件表3.各个miRNA所使用的MicroRNAAssayMix针对各个miRNA所分别得到的PCR产物通过FAMTM染料的荧光fluorescence来进行检测，据此计算出循环阈值[cyclethresholdCtvalue]，接着使用比较性Ct方法comparativeCtmethod并依据cel-miR-39所得到的PCR产物的循环阈值来进行标准化以校正操作误差，并且进一步依据各个样品所测得的总RNAs浓度来进行标准化以校正不同样品之间的浓度差异，以计算出各个miRNA的表达水平Ct。接着，通过受试者操作特征ROC曲线分析来评估各个miRNA的表达水平是否具有良好的诊断力而可区别AMI+AKI-组以及AMI+AKI+组的病患，并且进一步使用尤登指数分析Youden’sindexanalysis来决定最佳截断值optimalcut-offvalue。所得到的结果被显示于下面表4与表5中。由表4与表5可见，AMI+AKI+组的miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p的表达水平显著地低于AMI+AKI-组所具者，而在AMI+AKI+组的miR-127-3p、miR-214-3p以及miR-494-3p的表达水平与AMI+AKI-组所具者之间则无显著的差异存在。这个结果表示miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p可作为一种用于预测带有急性心肌梗塞的病患是否会发展出急性肾损伤的生物标记，而miR-127-3p、miR-214-3p以及miR-494-3p则不能。当以miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p的表达水平的截断值来进行检测时也就是具有低于截断值的表达水平的个体被认为会发展出急性肾损伤，miR-23a-3p能得到高达92.31％的诊断特异性，而miR-24-3p以及miR-145-5p能分别得到高达82.61％与86.96％的诊断灵敏性。此外，miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p的表达水平的AUC分别为0.801、0.828以及0.763，这表示miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p皆具有良好的诊断力。B.多个miRNA的表达水平的关联性评估：为了了解miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p的组合使用是否能够进一步提升诊断力，所述miRNA的不同组合的逻辑式回归模型logisticregressionmodel被建立，而用来计算带有急性心肌梗塞的病患将会发展出急性肾损伤的机率probability即logit[PrY＝1]，其中，Y＝1表示带有急性心肌梗塞的病患将会发展出急性肾损伤的公式被显示如下：1组合miR-23a-3p与miR-24-3p的公式I：logit[PrY＝1]＝13.962+0.982×A－1.987×BA＝miR-23a-3p的表达水平CtB＝miR-24-3p的表达水平Ct2组合miR-24-3p与miR-145-5p的公式II：logit[PrY＝1]＝17.11－1.984×C+0.901×DC＝miR-24-3p的表达水平CtD＝miR-145-5p的表达水平Ct3组合miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p的公式III：logit[PrY＝1]＝17.12+0.742×E－2.558×F+0.772×GE＝miR-23a-3p的表达水平CtF＝miR-24-3p的表达水平CtG＝miR-145-5p的表达水平Ct此外，ROC曲线分析的结果与截断值被显示于下面表6中。由表6可见，无论2种或3种miRNA的组合，AMI+AKI+组所测得的发展出急性肾损伤的机率皆显著地高于AMI+AKI-组所具者，并且当以此机率的截断值来进行检测时也就是具有高于截断值的机率的个体被认为会发展出急性肾损伤，所得到的AUC皆高于单一miRNA所具者。特别地，miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p这3者的组合使用能够得到最高的诊断灵敏度95.65％。这个实验结果显示：miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p中的任二者或任三者的组合相较于单独使用能够展现协同效应synergiceffect而提供更佳的诊断力。于本说明书中被引述的所有专利和文献以其整体被并入本申请作为参考资料。若有所冲突时，本申请详细说明包含界定在内将占上风。虽然本发明已参考上述特定的具体例被描述，明显地在不背离本发明的范围和精神下可作出很多的修改和变化。因此意欲的是，本发明仅受如权利要求所示者的限制。

权利要求：1.一种用于预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测miRNA的表达水平的试剂，所述miRNA选自于由下列所构成的群组：miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-145-5p，以及它们的组合。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述miRNA是miR-23a-3p。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述miRNA是miR-24-3p。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述miRNA是miR-145-5p。5.用于检测miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，其特征在于，所述miRNA选自于由下列所构成的群组：miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-145-5p，以及它们的组合，以及使用所述试剂盒来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的步骤包括：自带有急性心肌梗塞的人类个体获得血液样品；检测所述血液样品中的所述miRNA的表达水平；以及令所述血液样品中所检测到的miRNA的表达水平与预设标准相比较，其中若所述血液样品中所检测到的miRNA的表达水平低于所述预设标准，所述人类个体被认定为会发展出急性肾损伤。6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述miRNA是miR-23a-3p。7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述miRNA是miR-24-3p。8.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述miRNA是miR-145-5p。9.用于检测至少2个miRNA的表达水平的试剂供应用于制备用来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的试剂盒的用途，其特征在于，所述至少2个miRNA选自于由下列所构成的群组：miR-23a-3p、miR-24-3p、miR-145-5p，以及它们的组合，以及使用所述试剂盒来预测带有急性心肌梗塞的人类个体是否会发展出急性肾损伤的步骤包括：自带有急性心肌梗塞的人类个体获得血液样品；检测所述血液样品中的所述至少2个miRNA的表达水平；将所述血液样品中所检测到的至少2个miRNA的表达水平代入逻辑式回归模型来计算发展出急性肾损伤的机率；以及令所计算出的机率与预设标准相比较，其中若所计算出的机率高于所述预设标准，所述人类个体被认定为会发展出急性肾损伤。10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述至少2个miRNA是miR-23a-3p以及miR-24-3p。11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述逻辑式回归模型如下：logit[PrY＝1]＝13.962+0.982×A－1.987×B其中，logit[PrY＝1]表示所述人类个体将会发展出急性肾损伤的机率；A＝miR-23a-3p的表达水平Ct；以及B＝miR-24-3p的表达水平Ct。12.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述至少2个miRNA是miR-24-3p以及miR-145-5p。13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述逻辑式回归模型如下：logit[PrY＝1]＝17.11－1.984×C+0.901×D其中，logit[PrY＝1]表示所述人类个体将会发展出急性肾损伤的机率；C＝miR-24-3p的表达水平Ct；以及D＝miR-145-5p的表达水平Ct。14.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述至少2个miRNA是miR-23a-3p、miR-24-3p以及miR-145-5p。15.根据权利要求14所述的用途，其特征在于，所述逻辑式回归模型如下：logit[PrY＝1]＝17.12+0.742×E－2.558×F+0.772×G其中，logit[PrY＝1]表示所述人类个体将会发展出急性肾损伤的机率；E＝miR-23a-3p的表达水平Ct；F＝miR-24-3p的表达水平Ct；以及G＝miR-145-5p的表达水平Ct。16.根据权利要求5或9所述的用途，其特征在于，所述血液样品被拿来进行检测之前先经过血液分离处理，以分离出血清来供检测miRNA的表达水平之用。17.根据权利要求5或9所述的用途，其特征在于，所述miRNA的表达水平使用下列方法学的至少一者来进行检测：聚合酶链反应、实时聚合酶链反应、反转录聚合酶链反应、定量反转录聚合酶链反应、杂交、探针杂交以及基因表达阵列。

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