申请/专利权人：哈尔滨工业大学

申请日：2021-01-12

公开（公告）日：2023-01-06

公开（公告）号：CN112662562B

主分类号：C12N1/06

分类号：C12N1/06;C12N1/20;A01N33/12;A01N25/26;A01N25/10;A01P1/00;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.01.06#授权;2021.05.04#实质审查的生效;2021.04.16#公开

摘要：一种基于酵母菌细胞壁伪装构筑人工细胞模型靶向捕获杀死大肠杆菌的方法。所述方法如下：步骤一，大肠杆菌的培养；步骤二，酵母菌细胞壁的制备；步骤三，无膜团聚体模型的制备；步骤四，基于酵母菌细胞壁伪装团聚体人工细胞模型的构筑；步骤五，人工细胞模型对两种类型大肠杆菌的靶向捕获；步骤六，人工细胞模型对细菌的杀死作用。本发明的优点：提供了一种简单的高效的酵母菌细胞壁伪装团聚体构筑人工细胞模型的方法，在人工细胞和细菌之间建立一种化学通信和信号传递，揭示了人工细胞模型与细菌之间的识别、凝集、吞噬并杀死细菌的动态过程，实现了一种可程序化调控人工细胞靶向捕获、吞噬并且杀菌的应用。

主权项：1.一种基于酵母菌细胞壁伪装构筑人工细胞模型靶向捕获杀死大肠杆菌的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：步骤一、大肠杆菌的培养1表达FimH凝集素的大肠杆菌的培养：将菌株置于培养基中，在温度为35℃～37℃的摇床中进行培养增殖，培养到指数生长期后取用；2不表达FimH凝集素的肠出血性大肠杆菌的培养：将菌株置于培养基中，在温度为35℃～37℃的摇床中进行培养增殖，培养到指数生长期后取用；3采用0.01～0.05molL的磷酸缓冲溶液分布对培养后的大肠杆菌进行清洗，离心收集细菌；步骤二、酵母菌细胞壁的制备1酵母菌细胞壁的破碎：选择酵母为生物模板，通过球磨机对酵母菌溶液进行多次反复研磨，离心转速为4000～6000转分离心5～10分钟，取上清液，冷冻干燥，得到研磨成纳米级的酵母菌细胞壁碎片；2酵母菌细胞壁悬浊液的配制：将细胞壁溶解到无菌PBS缓冲溶液中，配制出0.5～10mgmL的酵母菌细胞壁悬浊液；步骤三：无膜团聚体模型的制备1季铵盐化的直链淀粉的合成：将直链淀粉和氢氧化钠溶于去离子水中，加热搅拌至直链淀粉完全溶解，然后加入3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵溶液，继续反应，透析，冷冻干燥，得到季铵盐化直链淀粉；所述直链淀粉水溶液的浓度为9～11mgmL，氢氧化钠浓度为18～20mgmL，3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵溶液的浓度为0.1mgmL～0.3mgmL；2季铵盐化直链淀粉溶液的配制：将合成的季铵盐化直链淀粉溶解到磷酸缓冲溶液中，配制出2～10mgmL的季铵盐化直链淀粉溶液；3透明质酸溶液的配制：将透明质酸溶解到磷酸缓冲溶液中，配制出0.5～5mgmL的透明质酸溶液；4将2的溶液加入到3的溶液中，利用涡旋震荡仪震荡20～30s，得到无膜团聚体模型；季铵盐化直链淀粉溶液与透明质酸溶液的体积比为1～2：1；步骤四、基于酵母菌细胞壁伪装团聚体人工细胞模型的构筑将步骤二得到的细胞壁悬浊液加入到步骤三中得到的团聚体模型中涡旋震荡，得到团聚体表面伪装一层酵母菌细胞壁膜的人工细胞模型；步骤五、人工细胞模型对两种类型大肠杆菌的粘附将步骤一中等量的两种类型的大肠杆菌滴入到步骤四得到的人工细胞溶液中，100rmin条件下搅拌，对细菌进行定向捕获；步骤六、人工细胞模型对细菌的杀死作用利用碘化丙啶染色剂对细菌染色，通过激光共聚焦显微镜观察细菌的死活情况。

全文数据：

权利要求：

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