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申请/专利权人：上饶师范学院

摘要：本发明公开了一种怀玉山高山马铃薯包埋玻璃化法超低温脱毒的方法，属于生物技术领域。本发明首先将怀玉山高山马铃薯茎尖包埋制成包埋珠，然后对得到的怀玉山高山马铃薯茎尖包埋珠进行两次预培养和两次装载处理，脱水后，经液氮超低温保存处理后化冻，然后将得到的茎尖先进行暗培养再进行光照培养，得到怀玉山高山马铃薯的脱毒植株。本发明培育得到的怀玉山高山马铃薯脱毒植株生长状态良好，成活率高，脱毒率显著提高，同时本发明还具有制备方法简单易行、培养周期短的特点，能够实现批量生产。

主权项：1.一种怀玉山高山马铃薯包埋玻璃化法超低温脱毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：1无菌条件下，将怀玉山高山马铃薯茎尖与含海藻酸钠和蔗糖的无钙离子改良MS培养液混合均匀，得混合液；2包埋：无菌条件下，将步骤1的混合液滴入含有壳寡糖、石墨烯量子点、碳纳米管、CaCl2和蔗糖的MS培养液中进行包埋，得到怀玉山高山马铃薯茎尖包埋珠；3一次预培养：无菌条件下，将怀玉山高山马铃薯茎尖包埋珠用含壳寡糖和石墨烯量子点的MS培养液进行一次预培养；4二次预培养：无菌条件下，将经过一次预培养处理的怀玉山高山马铃薯茎尖包埋珠用含壳寡糖和碳纳米管的MS培养液进行二次预培养；5一次装载：无菌条件下，将经过两次预培养的怀玉山高山马铃薯茎尖包埋珠用含壳寡糖和石墨烯量子点的MS培养液进行装载；6二次装载：无菌条件下，将步骤5得到的怀玉山高山马铃薯茎尖包埋珠用含壳寡糖和碳纳米管的MS培养液进行二次装载；7脱水处理：无菌条件下，将步骤6得到的怀玉山高山马铃薯茎尖包埋珠用含25%甘油＋20%乙二醇＋15%壳寡糖+0.4M石墨烯量子点+0.4M碳纳米管的MS培养液进行脱水处理；8无菌条件下，将步骤7经过脱水处理的怀玉山高山马铃薯茎尖包埋珠置于液氮中保存，然后进行化冻，将茎尖从化冻后的怀玉山高山马铃薯茎尖包埋珠中取出，在含1.2M蔗糖的MS+0.05gL壳寡糖+0.03-0.05gL石墨烯量子点+0.03-0.05gL碳纳米管的MS液体培养基中洗涤，洗涤后的茎尖先进行暗培养，然后在光照培养条件下培养，即得怀玉山高山马铃薯的脱毒植株；所述步骤1中海藻酸钠与无钙离子改良MS培养液的质量体积比为3%，蔗糖浓度为0.2molL；所述步骤2中壳寡糖浓度为0.05gL，石墨烯量子点浓度为0.03-0.05gL、碳纳米管浓度为0.03-0.05gL、CaCl2浓度为0.1molL、蔗糖浓度为0.2molL；所述步骤3中壳寡糖浓度为0.05gL，石墨烯量子点浓度为0.3-0.5gL；所述步骤4中壳寡糖浓度为0.05gL，碳纳米管浓度为0.3-0.5gL；所述步骤5中，壳寡糖浓度为2M，石墨烯量子点浓度为0.4M；所述步骤6中，壳寡糖浓度为2M，碳纳米管浓度为0.4M。

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