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申请/专利权人：山东大学
摘要：本发明公开了一种目的基因多拷贝整合到酿酒酵母染色体rDNA的方法，是将待转化的酿酒酵母先在含有羟基脲的培养基上进行预培养，然后再通过常规转化方法将两端带有rDNA同源序列的DNA片段转入酿酒酵母，最后在筛选培养基上筛选转化子实现。本发明方法利用rDNA拷贝动态平衡的特点，建立了一次转化过程即在rDNA上整合了18个拷贝目的基因的方法。该方法以rDNA为整合靶点，操作便捷，无需额外引入除了重组DNA片段之外的其他DNA；并且，由于其所依赖的特殊机制，理论上可以和现有其他各种高拷贝重组方法联用，实现目的基因更高拷贝的整合，为基因编辑又提供了一种方法和有力的工具。
主权项：1.一种目的基因多拷贝整合到酿酒酵母染色体rDNA的方法，是将待转化的酿酒酵母先在含有羟基脲的培养基上进行预培养，然后再通过常规转化方法将两端带有rDNA同源序列的DNA片段转入酿酒酵母，最后在筛选培养基上筛选转化子实现；其特征在于：所述含有羟基脲的培养基是指在酵母常规培养基的基础上，添加终浓度为150mM的羟基脲；所述在含有羟基脲的培养基上预培养的方法是：将待转化的酿酒酵母活化后，转接到含羟基脲的培养基中培养，按每两天转接一次，每次都是转接到新鲜的含有羟基脲的培养基中，总共培养6-8天；所述两端带有rDNA同源序列的DNA片段含有筛选标记基因表达盒和目的基因表达盒，其组成及顺序为3’-rDNA同源序列1-筛选标记基因表达框-目的基因表达框-rDNA同源序列2-5’；其中rDNA同源序列1或rDNA同源序列2是5SrDNA或35SrDNA区域的同源序列，筛选标记基因表达框或目的基因表达框上下游顺序随意，目的基因表达框可以是一个或多个；其中筛选标记基因是抗生素抗性基因G418；所述筛选培养基针对的是引入转化子并表达的筛选标记基因，是带有20000mgLG418，同时含有60mM羟基脲的YEPD培养基。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 山东大学 一种目的基因多拷贝整合到酿酒酵母染色体rDNA的方法
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