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申请/专利权人：中国科学院植物研究所;上海汉禾生物新材料科技有限公司
摘要：本发明提供一种里氏木霉RUT‑C30遗传转化方法，包括如下步骤：a将外源质粒与里氏木霉RUT‑C30原生质体在聚乙二醇水溶液中混合并进行冰浴10‑20min；b向混合体系中继续加入8‑10倍体积的聚乙二醇水溶液，室温下转化培养5‑6min，加入STC试剂沉淀转化后的原生质体再悬浮；c将转化后的原生质体移至木霉筛选培养基中培养5‑7天后挑取转化株，再移至木霉琼脂培养基中扩繁，获得转化株孢子悬浮液，将孢子悬浮液接种至木霉种子培养基过夜培养获得转化株菌丝。本发明将pAN7‑1潮霉素表达质粒成功转化RUT‑C30菌株，转化株阳性率23‑41％，成功建立里氏木霉RUT‑C30的遗传转化系统。
主权项：1.一种里氏木霉RUT-C30遗传转化方法，包括如下步骤：a将外源质粒与里氏木霉RUT-C30原生质体在聚乙二醇水溶液中混合并进行冰浴10-20min；b向混合体系中继续加入8-10倍体积的聚乙二醇水溶液，室温下转化培养5-6min，加入STC试剂沉淀转化后的原生质体再悬浮；c将转化后的原生质体移至木霉筛选培养基中培养5-7天后挑取转化株，再移至木霉琼脂培养基中扩繁，获得转化株孢子悬浮液，将孢子悬浮液接种至木霉种子培养基过夜培养获得转化株菌丝；其中步骤a）中的PEG为多臂聚乙二醇，分子量为4000-6000，多臂聚乙二醇包括双臂聚乙二醇、三臂聚乙二醇、四臂聚乙二醇中的一种，所述聚乙二醇水溶液成分为：250-300gL多臂聚乙二醇，40-60mL1M的CaCl2，5-15mL1M的Tris；双臂聚乙二醇结构式为： ，n为42-66之间的整数；三臂聚乙二醇结构式为： ，p为29-44之间的整数；四臂聚乙二醇结构式为： ，q为22-34之间的整数；其中步骤c）中所述的筛选培养基中含有1.5gL甜菜碱和15mLL蒲公英浸出液。
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