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申请/专利权人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所
摘要：本发明公开了一种分离鉴定百合木贼镰刀菌的方法，包括以下步骤：分离纯化病原菌，设计特异性引物：获取尖孢镰刀菌百合专化型、共享镰刀菌、木贼镰刀菌、禾谷镰刀菌、层出镰刀菌的基因组，将木贼镰刀菌基因组与其他四种镰刀菌基因组两两比较，通过贪婪算法将两个基因组中能够匹配的序列延伸，不能匹配的片段即为木贼镰刀菌基因组的特异序列；将序列在NCBI网站比对，选择没有比对数据及比对数据较少的序列进行引物设计；PCR鉴定病原菌。本发明从百合上分离出了新的镰刀属致病菌，鉴定为百合木贼镰刀菌，该百合木贼镰刀菌特异性引物的设计基于基因组，非ITS区。
主权项：1.一种分离鉴定百合木贼镰刀菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、分离纯化病原菌：取百合发病鳞片，流水冲洗干净后进行表面灭菌，切取病健交界处组织于PDA固体培养基上培养，待菌落出现后，挑取菌落边缘菌丝转接于PDA平板上进行纯化培养；S2、设计特异性引物：获取尖孢镰刀菌百合专化型、共享镰刀菌、木贼镰刀菌、禾谷镰刀菌、层出镰刀菌的基因组，将木贼镰刀菌基因组与其他镰刀菌基因组两两比较，通过贪婪算法将两个基因组中能够匹配的序列延伸，不能匹配的片段即为木贼镰刀菌基因组的特异序列；将特异序列在NCBI网站比对，选择没有比对数据及比对数据较少的序列进行引物设计；将木贼镰刀菌的特异性引物对命名为Fe-liliiFFe-liliiR，正向引物Fe-liliiF的碱基序列为5＇－CGAAGAAGCCTCTCGGACCAT－3＇，反向引物Fe-liliiR的碱基序列为5＇－CGTAGCCAGCCATGATGATGTG－3＇；S3、PCR鉴定病原菌：用特异引物Fe-liliiFFe-liliiR对分离纯化得到的病原菌进行PCR扩增，若病原菌能通过特异引物Fe-liliiFFe-liliiR进行扩增，则确定其为木贼镰刀菌。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一种分离鉴定百合木贼镰刀菌的方法
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