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申请/专利权人：清华大学
摘要：本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas13aCas12a反式切割和石墨烯场效应晶体管的核酸检测方法，将Cas13aCas12a固定在石墨烯表面后或者在溶液中与靶向不同病毒核酸的crRNA结合，构建Cas13aCas12a‑crRNA复合物，用于快速切割修饰在gFET上的ssRNAssDNA，进而引发转移特性曲线的变化，实现对多种病毒核酸的响应。
主权项：1.一种非诊断目的的核酸检测方法，其特征在于，其使用场效应晶体管放大固定于石墨烯表面Cas13aCas12a反式切割的检测信号；所述方法包括场效应晶体管的制备步骤、Cas13aCas12a和报告分子修饰步骤、Cas13aCas12a-crRNA复合体的构建步骤以及核酸检测步骤；所述场效应晶体管的制备步骤包括：定制商业化gFET芯片，经引线后，构建聚二甲基硅氧烷微流控腔室，将微流控腔室用环氧树脂胶固定于芯片上，并将进液和出液管道插入腔室，用胶封保证腔室密闭，出液管另一端与泵相连，用于液体的抽吸；Cas13aCas12a和报告分子修饰步骤包括将1-3mM的PBASE溶液在石墨烯通道表面孵育1-2h、MgCl2溶液清洗、将1-5μM的PEG和氨基修饰的ssRNAssDNA溶液加入石墨烯表面2-12h、使用100-500mM的乙醇胺溶液封闭1h；所述PBASE溶液溶剂为乙醇或DMF；其中所述Cas13aCas12a-crRNA复合体的构建步骤包括用体积比为1:1的N-3-二甲氨基丙基-N’-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺活化PEG尾端的羧基，活化时间为5-10min；Cas13aCas12a溶液和crRNA溶液分别先后引入石墨烯表面各孵育30min-60min，使Cas13aCas12a固定在石墨烯表面后与crRNA形成Cas-crRNA复合体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 清华大学 基于CRISPR-Cas反式切割和gFET核酸检测
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