申请/专利权人：吉林农业科技学院

申请日：2023-05-06

公开（公告）日：2024-01-02

公开（公告）号：CN116676411B

主分类号：C12Q1/6895

分类号：C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.02#授权;2023.09.19#实质审查的生效;2023.09.01#公开

摘要：本发明公开了一种ZmPRX19基因突变检测引物及其在筛选体细胞再生能力强玉米自交系中的应用，利用该特异性引物对玉米中ZmPRX19基因的目标片段进行扩增并测序，如果所得核酸序列相比野生型对照发生了移码突变或大片段碱基插入缺失，那么我们推测该自交系的体细胞再生能力较差，不能作为玉米遗传转化的直接受体。利用本发明可以从基因水平直接对核心自交系的体细胞再生情况进行预测，相比于对每个玉米材料分别进行组织培养，鉴定体细胞再生性状；更有利于快速筛选体细胞再生能力强、可用于遗传转化的玉米自交系。节省了开展植物组织培养实验的人力、物力和财力。

主权项：1.一种ZmPRX19基因突变检测引物在筛选体细胞再生能力强玉米自交系中的应用，包括以下步骤：S1、选择体细胞再生能力强、广泛用于遗传转化的玉米自交系KN5585为受体，根据其基因组中ZmPRX19基因的核酸序列设计双靶点，构建目标基因的CRISPRCas9编辑载体；所述ZmPRX19基因突变检测引物包括： ZmPRX19-F:AAACAAGGCCCTCCTTTCCC； ZmPRX19-R:AATCAGCACGAGGACACCAA；S2、利用农杆菌介导法将构建的重组载体转入受体自交系中，获ZmPRX19基因纯合突变的玉米突变体，分别命名为Zmprx19-1、Zmprx19-2和Zmprx19-3；S3、将玉米突变体Zmprx19-1、Zmprx19-2、Zmprx19-3及其野生型对照种植在温室；当达到开花期时进行自交授粉，在授粉后13天从每个材料随机摘取10个果穗带回实验室，在无菌操作台上从每个果穗分别剥取50个幼胚用于组织培养，鉴定胚性愈伤诱导率，绿化愈伤率和绿苗再分化率三个体细胞再生性状；同时，利用上述特异性引物，分别对突变体及其野生型对照的ZmPRX19基因的靶点区段进行核酸扩增并测序，通过序列比对，明确突变体靶点区域的突变类型；S4、根据步骤S3所得的数据，对不同突变类型材料及其野生型对照的表型进行方差分析，明确ZmPRX19靶点区域的移码突变或大片段碱基插入缺失会导致玉米的体细胞再生能力降低；快速初步筛选高频体细胞再生的玉米自交系。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 吉林农业科技学院 一种ZmPRX19基因突变检测引物及其在筛选体细胞再生能力强玉米自交系中的应用

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