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申请/专利权人：云南省烟草农业科学研究院

摘要：本发明涉及一种木贼镰刀菌的检测方法及其应用，所述的检测方法包括特异性引物组：Fe‑EF‑spec1FFe‑EF‑spec1R。本发明有益效果为，1、现有技术中没有针对PCR检测烟草镰刀菌根腐病病原菌木贼镰刀菌的特异性引物，本发明实现了零的突破；2、本发明研究筛选出的引物具有极高的准确度和特异性；3、综合使用本发明的方法，其最大灵敏度可达1.0ngμL；4、本发明的应用在于检测疑似被木贼镰刀菌侵染的烟株最小时间为24小时；5、本发明能在接种木贼镰刀菌后早期检测到病原菌，达到烟草镰刀菌根腐病早期检测的目的，对于烟草镰刀菌根腐病的早期检测，预防和控制具有非常重要的意义和重大的经济意义。

主权项：1.一种木贼镰刀菌的检测方法，其特征在于，检测方法应用于烟草镰刀菌根腐病的早期检测、预防和控制；检测木贼镰刀菌的灵敏度为1.0ngμL；所述的检测方法包括特异性引物组：正向引物Fe-EF-spec1F：5′-TTCGAGAAGGTTGGTTTCCA-3′；反向引物Fe-EF-spec1R：5′-AAGAACCCAGGCGTACTTG-3′；所述的检测方法包括以下步骤：S1：提取待检测样品DNA；S2：以待测样品为DNA为模板，采用一对引物进行PCR扩增；PCR扩增的反应体系总体积为25μL，包括10×TaqPCRbuffer2.5μL，2.0μLdNTP各0.25mmolL，1.0UTaq聚合酶5UμL，1.0μL上下游引物5×10-3mmolL，1μL模板DNA，无菌ddH2O补足至25μL；PCR扩增程序为：94℃预变性3min，94℃变性1min，55℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环，72℃总延伸7min；S3：扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析；所述的特异性引物组Fe-EF-spec1FFe-EF-spec1R对应的扩展片段大小为290bp；序列为TTCGAGAAGGTTGGTTTCCATTTTCCTCGATCGCACGCCCTCTGCCCATCGATCCATCACCCGAATTAGTCTCGACGACTGAACATGCGCCTGTTACCCCGCTCGAGTACAAAATTTTGCGGTTCAATCGTAATTTTTTGGTGGGGCTTATACCCCGCTACTCGAGTGACAGGCGCTTGCCCTCTTCCCACAAAATCACTTGCGCATCACGTGTCAATCAGTCACTAACCACTCGACAATAGGAAGCCGCCGAGCTCGGTAAGGGTTCCTTCAAGTACGCCTGGGTTCTT。

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