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申请/专利权人：中南大学湘雅医院

摘要：本发明公开一种奥西替尼耐药肺癌脑转移颅内的原位PDX模型构建方法，方法包括：对肿瘤标本进行剔除掉电凝烧灼部分的肿瘤细胞；将肿瘤细胞保存在无血清的DMEM离心管中；取出肿瘤细胞，在培养皿中切成小片，加入第一培养液培养后进行吹打，并离心后获得单个细胞；立体定向仪固定，注射预设数量的肿瘤细胞至裸鼠的脑内；收取部分裸鼠大脑；冠状位切取有肿瘤的小鼠大脑，与患者的HE及免疫组化染色进行对比；并将收获的部分小鼠PDX肿瘤制成细胞悬液并计数，模拟患者的奥希替尼等药物测试；将部分细胞悬液继续接种至裸鼠颅内进行传代，完成耐药肺癌脑转移颅内原位PDX模型。可以快速用于研究奥希替尼耐药机制及高通量药物筛选、或者其它治疗的筛选。

主权项：1.一种奥西替尼耐药肺癌脑转移颅内的原位PDX模型构建方法，其特征在于，包括：步骤A：获取奥希替尼耐药患者的肿瘤标本，对肿瘤标本进行剔除掉电凝烧灼部分的肿瘤细胞，留取活性部分肿瘤；步骤B：将肿瘤细胞保存在无血清的DMEM离心管中；步骤C：取出肿瘤细胞，在培养皿中切成小片，加入第一培养液培养后进行吹打，并离心后获得单个细胞；步骤D：立体定向仪固定，注射预设数量的肿瘤细胞至裸鼠的脑内；步骤E：当小鼠出现体重明显下降，食欲差、或者神经系统症状时，收取部分裸鼠大脑；步骤F：冠状位切取有肿瘤的小鼠大脑，进行HE切片染色及CK7、TTF-1免疫组化染色，与患者的HE及免疫组化染色进行对比；步骤G：在步骤F执行的同时，将剩余小鼠基于无菌显微镊分离颅内转移瘤，完整将小鼠PDX肿瘤取出并保存至无菌培养皿，无菌刀片将肿瘤切除预设尺寸的小块，无菌离心管收集预设尺寸的肿瘤小块，加入第一预设容量的第一培养液在培养箱中培养预设时长；加入第二预设容量的第二培养液，离心去上清，再加入第三预设容量的第二培养液，吹打细胞团，再加入第二预设容量的第二培养液，过滤器过滤，收集细胞悬液并计数，每个培养瓶一百万个细胞10ml第二培养液接种，得到原位PDXC模型，并将部分细胞悬液继续接种至裸鼠颅内进行传代，完成耐药肺癌脑转移颅内原位PDX模型；步骤H：在步骤G执行的同时，取部分细胞悬液中的细胞基于预设细胞数量接种于六孔板中的各个孔内，放入Incucyte细胞培养及监控仪，实时监控拍照，绘制生长曲线；步骤I：将PDXC传代3代后，取部分细胞进行奥希替尼药物敏感性检测，对照组为HCC4006细胞株。

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