申请/专利权人：南京启真基因工程有限公司

申请日：2021-02-26

公开（公告）日：2024-04-23

公开（公告）号：CN114958762B

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C12N15/12;C12N15/85;C12N15/55;C12N15/113;C12N15/90;A01K67/0276;A01K67/0278;A61K49/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.23#授权;2022.09.16#实质审查的生效;2022.08.30#公开

摘要：本发明公开了一种构建神经组织特异过表达人源SNCA的帕金森病模型猪的方法及应用，具体涉及一种采用CRISPRCas9系统及同源重组技术构建的在基因组中的特定位置整合并由人源神经组织特异性表达启动子Syn驱动表达人源SNCA基因的猪重组细胞及由该重组细胞通过体细胞克隆技术所获得的帕金森病模型猪。本发明提供了制备重组细胞的方法，将命名为DNA分子甲的DNA分子整合至猪细胞的基因组DNA，得到重组细胞；所述DNA分子甲中具有人源SNCA基因。将所述重组细胞作为核移植供体细胞进行体细胞克隆，得到了克隆猪，即为帕金森病模型猪。该模型猪可用于下一步的药物筛选及药效评价、基因及细胞治疗、帕金森病发病机制的研究等生物医药领域。

主权项：1.一种制备重组细胞的方法，包括如下步骤：将DNA分子甲整合至猪细胞的基因组DNA的COL1A1基因位点中，得到重组细胞；所述DNA分子甲中具有人源SNCA基因；所述“将DNA分子甲整合至猪细胞的基因组DNA的COL1A1基因位点中”的实现方式为：将具有DNA分子乙的重组质粒与两个辅助质粒共同导入猪细胞；所述DNA分子乙中，具有所述DNA分子甲且在所述DNA分子甲的上游具有上游同源臂且在所述DNA分子甲的下游具有下游同源臂，所述上游同源臂和所述下游同源臂用于将所述DNA分子甲整合至猪细胞的基因组DNA的COL1A1基因位点中；所述人源SNCA基因编码如SEQIDNO：12所示的蛋白质；所述上游同源臂如SEQIDNO：9所示，所述下游同源臂如SEQIDNO：10所示；所述两个辅助质粒为sgRNA质粒和质粒pKG-GE3；所述sgRNA质粒转录得到特异sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：16中第1-20位核苷酸所示；所述质粒pKG-GE3如SEQIDNO：2所示；所述DNA分子甲中具有人源SNCA基因表达盒；人源SNCA基因表达盒中，启动子为人源神经组织特异性表达启动子，由同一启动子驱动4个拷贝的人源SNCA基因表达。

全文数据：

权利要求：

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