申请/专利权人：首都医科大学宣武医院;北京市老年病医疗研究中心

申请日：2024-01-19

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN117586952B

主分类号：C12N5/078

分类号：C12N5/078

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.26#授权;2024.03.12#实质审查的生效;2024.02.23#公开

摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分离血浆外泌体的分离试剂及分离方法。分离试剂包括聚乙二醇、硫酸铵和水。分离试剂采用亲水聚合物聚乙二醇配合无机盐硫酸铵，使外泌体从血浆样本中析出，可在1‑2h内分离纯化血浆中的总外泌体，实现高效分离，且无需特殊离心设备，具有回收率高、纯度高、价格低廉的特点，能够满足科研和临床检测应用，与国际常用的血浆外泌体分离试剂效果相当。

主权项：1.一种分离血浆外泌体的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1：将血浆样本进行第一次离心，留取上清液，弃去沉淀；步骤S2：将步骤S1得到的上清液加入凝血酶轻弹混匀，室温处理一段时间后进行第二次离心，留取上清液，弃去沉淀；步骤S3：将步骤S2得到的上清液中加入分离试剂，上下颠倒混匀，在冰上沉淀，然后进行第三次离心，弃净上清液保留沉淀；所述分离试剂包括15%聚乙二醇、2%硫酸铵和83%水；分离试剂是将聚乙二醇、硫酸铵和水在室温下混合10min-15min，再使用0.22μm滤膜进行过滤得到；所述聚乙二醇的分子量为6000道尔顿；步骤S4：将步骤S3得到的沉淀用PBS充分溶解，得到血浆总外泌体溶液；步骤S1中，第一次离心是在4℃的条件下6000g离心30min；步骤S2中，步骤S1得到的上清液与凝血酶的体积比为125:1；凝血酶的浓度为611UmL；第二次离心是在4℃的条件下12000g离心5min；步骤S3中，步骤S2得到的上清液与所述分离试剂的体积比为1:1；上下颠倒的次数为8次；冰上沉淀的温度为0℃，时间为3min；第三次离心是在4℃的条件下1500g离心8min。

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