申请/专利权人：中山大学

申请日：2021-12-28

公开（公告）日：2024-04-30

公开（公告）号：CN114292914B

主分类号：C12Q1/6886

分类号：C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.30#授权;2022.04.26#实质审查的生效;2022.04.08#公开

摘要：本发明公开了一种可视化RNA甲基化检测方法及其应用，该检测方法基于特异性探针PP在甲基化位点两端形成环状结构，然后分别与FIP序列、BIP序列和SLP序列互补配对，然后根据扩增情况实现甲基化和非甲基化的鉴定。其相对于传统检测方法，检测更加灵敏，检出限为100amol，能够定性定量检测出待测样品中的甲基化位点的含量情况，无需复杂的仪器设备，检测成本低，检测耗时短，可以通过可视化有效判别结果，具有极高的应用价值。

主权项：1.一种利用RNA甲基化检测探针的非疾病诊断目的的RNA甲基化检测方法，其特征在于，所述RNA甲基化检测探针包括特异性探针PP序列、FIP序列、BIP序列和SLP序列，所述检测方法包括如下步骤：（1）将待测RNA与RNA甲基化检测探针中特异性探针PP混合进行环化，得到反应产物1；（2）将反应产物1与Bst2.0DNA聚合酶、SplintR连接酶混合进行闭环，得到反应产物2；（3）将反应产物2与RNA甲基化检测探针中的FIP序列、BIP序列、SLP序列和Bst2.0DNA聚合酶混合，恒温扩增，根据扩增产物量判断待测RNA位点中是否含有甲基化修饰；所述判断标准为：对照非甲基化位点，扩增产物显著变少，说明待测RNA位点含有甲基化位点；所述待测RNA位点为人18SrRNAA1832、NANOGmRNAA1095或LncRNA-MALAT1A2515；所述特异性探针PP的核苷酸序列如SEQIDNO:1、SEQIDNO:6或SEQIDNO:8所示；所述SEQIDNO:1针对于人18SrRNAA1832，SEQIDNO:6针对于NANOGmRNAA1095，SEQIDNO:8针对于LncRNA-MALAT1A2515；所述特异性探针PP的5’端还修饰有一个磷酸基团Phos；所述FIP序列的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示；所述BIP序列的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示；所述SLP序列的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示；所述甲基化为m6A。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中山大学 一种可视化RNA甲基化检测方法及其应用

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