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申请/专利权人：上海慧福德生物科技有限公司;北京大北农科技集团股份有限公司
申请日：2023-06-19
公开（公告）日：2024-05-03
公开（公告）号：CN117965621A
主分类号：C12N15/85
分类号：C12N15/85;C12N15/113;C12N9/22;A01K67/033
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.05.21#实质审查的生效;2024.05.03#公开
摘要：本发明公开了一种制备亮斑扁角水虻增重品系的方法及其核酸构建物。其方法包括：1构建Lsd1基因敲除核酸构建物，将模板引物sgRNA‑F与通用反向引物进行PCR，将PCR产物回收纯化，即得模板sgRNA；2将所述的sgRNA模板进行体外大量扩增，获得单链状态sgRNA，即得敲除核酸构建物；3将所述构建物和Cas9蛋白共转亮斑扁角水虻新鲜昆虫卵，孵化获得G0代，检测存在突变，自交得G1代；和，4将所述G1代突变杂合体进行2‑3代自交，检测获得纯合体，即得。本发明利用CRISPRCas9技术成功构建了体重增大的亮斑扁角水虻品系，在亮斑扁角水虻的资源化利用方面具有重要价值。
主权项：1.一种制备亮斑扁角水虻增重品系的方法，其特征在于，依次包括如下步骤：1构建Lsd1基因敲除核酸构建物，将模板引物sgRNA-F与通用反向引物进行PCR，将PCR产物回收纯化，即得模板sgRNA，其中，模板引物sgRNA1-F的序列如序列表中SEQNO.2所示，sgRNA2-F的序列如序列表中SEQNO.3所示，sgRNA3-F的序列如序列表中SEQNO.4所示，sgRNA4-F的序列如序列表中SEQNO.5所示，通用反向引物的序列如序列表中SEQNO.6所示；2将步骤1所述的sgRNA模板进行体外大量扩增，获得单链状态sgRNA，即得敲除核酸构建物；3将步骤2所述敲除核酸构建物和Cas9蛋白共转亮斑扁角水虻新鲜昆虫卵，孵化获得G0代，检测存在突变，自交得G1代；4将所述G1代突变杂合体进行2-3代自交，检测获得纯合体，即得。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 上海慧福德生物科技有限公司;北京大北农科技集团股份有限公司 一种制备亮斑扁角水虻增重品系的方法及其核酸构建物
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