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申请/专利权人：东北林业大学
申请日：2024-04-12
公开（公告）日：2024-05-28
公开（公告）号：CN118086382A
主分类号：C12N15/84
分类号：C12N15/84;C12N15/82;C12N15/65;C12N15/29;A01H5/02;A01H6/00
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.06.14#实质审查的生效;2024.05.28#公开
摘要：本发明属于农业生物技术领域和植物基因工程领域，公开了一种速效的农杆菌介导的鸢尾花粉遗传转化方法。该方法的主要步骤包括：选取茎干健壮、叶片无病虫害、花朵饱满未完全绽放的植株，于早上9点对其进行去雄，套袋；调整含有目标载体的工程农杆菌菌液至适当浓度，离心收集菌株，使用MSS重悬液重悬菌株，室温静止3h；收集花朵刚绽放花药未炸开时的花粉，将花粉转移至去雄花朵的柱头上，使用1ml注射器注射农杆菌MSS重悬液至含有花粉的柱头，用手指轻轻摩挲柱头，使花药充分浸泡在重悬液中，套密封遮光袋静置30min；授粉8h后，使用注射器吸取重悬液注射花粉管，使用密封遮光袋避光3d，然后去除遮光袋，使用授粉袋套袋，支架绑在处理植株上，避免倒伏；秋天收取种子后，使用MH液体培养基进行筛选培养，进行转基因植株鉴定。
主权项：1.一种速效的农杆菌介导的鸢尾花粉遗传转化方法，包含以下步骤：1选取茎干健壮、叶片无病虫害、花朵饱满未完全绽放的植株，于早上9点对其进行去雄，套袋；2调整含有目标载体的工程农杆菌菌液至适当浓度，离心收集菌株，使用MSS重悬液重悬菌株，室温静止3h；3收集花朵刚绽放花药未炸开时的花粉，将花粉转移至去雄花朵的柱头上，使用1ml注射器注射农杆菌MSS重悬液至含有花粉的柱头，用手指轻轻摩挲柱头，使花药充分浸泡在重悬液中，套密封遮光袋静置30min；4授粉8h后，使用注射器吸取重悬液注射花粉管，使用密封遮光袋避光3d，然后去除遮光袋，使用授粉袋套袋，支架绑在处理植株上，避免倒伏；5秋天收取种子后，使用MH液体培养基进行筛选培养，进行转基因植株鉴定；所述步骤13中的花朵和花粉为成熟的玉蝉花朵和花粉；所述步骤2中的MSS重悬液为MS+Sugar+SilwetL-77液体培养基；所述步骤5中的MH液体培养基为MS+Hyg培养基；本发明实施例中所述重悬液中农杆菌菌液OD600为1.5-1.8。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 东北林业大学 一种速效的农杆菌介导的鸢尾花粉遗传转化方法
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