申请/专利权人：上海大学

申请日：2022-03-28

公开（公告）日：2024-06-07

公开（公告）号：CN114755366B

主分类号：G01N33/00

分类号：G01N33/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.07#授权;2022.08.02#实质审查的生效;2022.07.15#公开

摘要：本发明提供了一种利用秀丽隐杆线虫综合分析化学品运动神经毒性的方法，本发明进行秀丽隐杆线虫培养和同步化处理，基于化学品外源污染物的环境相关浓度，进行秀丽隐杆线虫暴露，检测运动神经毒性相关的指标，并利用综合生物标志物响应指数系统评价化学品运动神经毒性。本发明在传统秀丽隐杆线虫运动指标的基础上，采用秀丽隐杆线虫全自动成像和行为追踪仪，进一步分析多项运动行为指标，并将指标进行综合生物标志物响应分析，系统评价化学品的运动神经毒性。该方法集显微观察与自动监测于一体，检测结果具有较高的准确性和可靠性，适合推广使用。

主权项：1.一种利用秀丽隐杆线虫综合分析化学品运动神经毒性的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤1、配制尿嘧啶缺陷型大肠杆菌液体培养基，置于高压蒸汽灭菌锅中120℃灭菌30min后，挑取菌落置于培养基中，振荡培养箱37℃、220rpm条件下振荡培养16h，作为线虫食物备用；步骤2、配制培养线虫专用的固体培养基，置于高压蒸汽灭菌锅中120℃灭菌30min后配制培养板，冷却备用；步骤3、配制裂解液，使用裂解液将处于孕期的秀丽隐杆线虫进行同步化处理，离心去除上清液，将收集到的虫卵转移至新的固体培养基中央，于20℃孵育16-18h；步骤4、确定化学品在真实环境介质，配制成环境浓度下的不同浓度梯度的化学品暴露溶液；其中，环境介质包括土壤、水体、沉积物以及生物体的浓度范围；步骤5、收集孵育成功的L1期秀丽隐杆线虫幼虫，均匀加入到配制好的不同浓度梯度的暴露液中，20℃恒温培养箱中黑暗条件下暴露培养72h，定期喂养特定量的食物；步骤6、收集不同浓度梯度暴露完成的秀丽隐杆线虫，加入2.386gKCl，2.98gNaCl于1L蒸馏水中定容，配置成k液，使用k液清洗3遍后，将线虫置于无食物的固体培养基上，置于体视显微镜下，观察并记录20s时间内，线虫的头部摆动次数、身体弯曲次数、泵咽次数，计算头部摆动频率、身体弯曲频率及泵咽频率；步骤7、收集不同浓度梯度暴露完成的秀丽隐杆线虫，使用k液清洗3遍后，利用秀丽隐杆线虫全自动成像和行为追踪仪检测线虫的运动波长、运动振幅、运动速度以及运动距离；步骤8、将不同浓度下多种检测指标结果进行综合生物标志物响应指数IBR分析，通过星状图显示多种生物标志物结果，并计算星状图面积得到综合生物标志物响应指数，系统评价环境浓度下化学品的运动神经毒性；首先，根据每种运动行为指标在各个浓度组中的平均值Xi，计算在所有浓度下，运动行为指标头部摆动、身体弯曲、泵咽、运动速度、振幅、速度、距离的总平均值m和标准差s；将平均值Xi值进行标准化计算得到处理后的值Yi，计算公式为Yi＝Xi-ms；若运动行为指标与暴露浓度呈正相关，令Z＝Yi，否则令Z＝-Yi；根据运动行为指标的分析结果，计算运动行为指标得分S＝Z+|min|，|min|表示所有浓度中，某个运动行为指标标准化后最小值的绝对值，即Yi中最小值的绝对值；S值作星状图；每个暴露浓度的星状图面积即为IBR值，计算公式如下： 其中：Ai表示生物标志物i在相邻两条辐射线上围成的三角形面积；Si与Si+1表示生物标志物i在顺时针方向连续两条辐射线上的S值；α＝2π,指相邻两条辐射线之间的夹角，n表示为生物标志物的数目。

全文数据：

权利要求：

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