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申请/专利权人：北京林业大学
申请日：2024-04-02
公开（公告）日：2024-06-14
公开（公告）号：CN118185990A
主分类号：C12N15/82
分类号：C12N15/82;A01H6/36;A01H5/00
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.14#公开
摘要：本发明公开了一种蓝莓原生质体瞬时转化的方法。本发明属于生物技术领域，具体涉及一种蓝莓原生质体瞬时转化的方法。蓝莓原生质体的瞬时转化方法包括如下步骤：1转化：将质粒Ca2+溶液与蓝莓原生质体悬浮液混合形成孵育液，随后加入PEG溶液，混匀得到孵育混合物；2培养：在所述孵育混合物中加入W5溶液终止反应，离心收集沉淀，再加入WI溶液，遮光培养，完成蓝莓原生质体的转化，转化效率达到30％。本发明为构建蓝莓在细胞层面上的基因表达系统，包括基因功能验证、基因表达调控、蛋白亚细胞定位、信号转导、RNA干扰和或基因编辑等生物学研究，提供了技术支撑。
主权项：1.蓝莓原生质体的瞬时转化方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1转化：将质粒Ca2+溶液与蓝莓原生质体悬浮液混合形成孵育液，随后加入PEG溶液，混匀得到孵育混合物；2培养：在所述孵育混合物中加入W5溶液终止反应，离心收集沉淀，再加入WI溶液，遮光培养，完成蓝莓原生质体的转化；其中步骤1中所述蓝莓原生质体的制备方法为如下：A1酶裂解：将蓝莓叶片或果实诱导出的愈伤组织作为酶解反应底物，通过酶解体系制备原生质体细胞；所述酶解体系的组成为：Yakult纤维素酶R-101.2％,wv、Yakult离析酶R-100.8％,wv、KCl0.15％,wv、CaCl2·2H2O0.14％,wv、MES0.43％,wv、甘露醇9.1％,wv、BSA0.15％,wv，余量为水；A2分离：将步骤A1反应体系中加入等体积W5溶液，终止所述酶解反应，过滤大块杂质，获得原生质体悬浮液；A3纯化：将步骤2所述的原生质体悬浮液与甘露醇溶液和蔗糖溶液混合，离心使三者分层，收集中间层细胞，并采用MMg溶液进行二次纯化，离心，收集离心后的沉淀为所述蓝莓原生质体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京林业大学 一种蓝莓原生质体瞬时转化的方法
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