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申请/专利权人：济南国科医工科技发展有限公司
申请日：2024-04-09
公开（公告）日：2024-06-14
公开（公告）号：CN118186058A
主分类号：C12Q1/6825
分类号：C12Q1/6825;C12Q1/6806;C12N15/11
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.14#公开
摘要：本发明公开了一种基于DNA水凝胶的垂直纸基传感器及miRNA检测方法，该方法为：将待测样本加入含有模板链和DNA聚合酶、切刻内切酶的反应体系中，反应后再加入连接链L2和预先制备的Y型DNA，反应后所得产物溶液转移至样品池内，样品池上方设置有垂直布置的滤纸条，且其下边缘接触样品池内液面，记录产物溶液在滤纸上流动上升的高度，然后根据预先构建的标准曲线计算得到待测样本中的目标miRNA浓度。本发明能解决现有miRNA检测方案中预处理程序复杂、灵敏度和准确性不高、检测时间长的问题，本发明的纸基传感器制备简单、成本低，对裁剪精度要求不高，适合于大量制备，能够实现靶标miRNA的快速灵敏检测。
主权项：1.一种基于DNA水凝胶垂直纸基传感器的miRNA检测方法，其特征在于，该方法为：将待测样本加入含有模板链和DNA聚合酶、切刻内切酶的反应体系中，反应后再加入连接链L2和预先制备的Y型DNA，反应后所得产物溶液转移至样品池内，样品池上方设置有垂直布置的滤纸条，且滤纸下边缘接触样品池内液面，记录产物溶液在滤纸上流动上升的高度，然后根据预先构建的表征产物溶液在滤纸上流动上升高度与目标miRNA浓度之间关系的标准曲线计算得到待测样本中的目标miRNA浓度；其中，模板链在DNA聚合酶的作用下形成双链，待测样本中的目标miRNA能够与模板链上的互补序列结合，竞争性地释放出所形成的双链上的连接链L1，连接链L1与反应体系中的连接链L2链杂交形成不完全互补配对的双链DNA，通过该DNA的5’末端与3’末端单链区域与Y型DNA末端单链区域进行杂交，最终形成具有三维网络结构的DNA水凝胶；该DNA水凝胶的形成使反应体系的粘度提高，从而使得产物溶液在滤纸上流动上升的高度下降，且该高度的大小与待测样本中的目标miRNA的浓度对数值呈线性关系。
全文数据：
权利要求：
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