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申请/专利权人：内蒙古大学
申请日：2024-03-29
公开（公告）日：2024-06-14
公开（公告）号：CN117965432B
主分类号：C12N5/076
分类号：C12N5/076;G01N15/149
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.14#授权;2024.05.21#实质审查的生效;2024.05.03#公开
摘要：本申请公开一种通过NAD+提高牛精子分选后活力的方法，涉及生物技术领域，用于解决流式细胞仪分选精子时会对精子造成损伤的问题。将牛精液稀释到一定浓度；向稀释好的牛精液中添加含烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（Nicotinamideadeninedinucleotide,NAD+）的分选液，进行孵育染色；将染色完成后的牛精液过筛，一定温度下第一保温一段时间，再进行第二保温一段时间；将第二保温后的精子送至进样舱，通过流式细胞分选仪对X、Y精子进行分选。本发明使用含NAD+的分选液对牛精子进行分选，使NAD+可以快速作用于分选后的X、Y精子上，提高分选后的精子活性，显著改善牛精子在通过性别分选后活力下降的现象。
主权项：1.一种通过NAD+提高牛精子分选后活力的方法，其特征在于，包括以下步骤：采集待分选的牛精液，利用稀释剂将所述牛精液稀释至1×108个mL；向稀释后的所述牛精液中添加分选液，在37℃下孵育28～32min，对所述牛精液进行染色；其中，所述分选液包括所述稀释剂和NAD+，所述分选液中NAD+的浓度为0.1～100μMmL，余量为稀释剂；将染色完成后的所述牛精液进行过筛，置于17～20℃恒温箱中进行第一保温20～30min，再置于2～6℃恒温箱进行第二保温20～40min；将所述第二保温后的精子送至进样舱，当变异系数达到2%时，通过流式细胞分选仪在无菌条件下，对X、Y精子进行分选；每100mL所述稀释剂由以下组分组成：葡萄糖0.80～1.20g、柠檬酸1.20～1.50g、Tris2.00～2.50g、双抗0.8～1.2mL、蛋黄液18～22mL、甘油2～4mL、Hoechst333420.08～0.12mL和胚胎水补齐至100mL。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 内蒙古大学 一种通过NAD+提高牛精子分选后活力的方法
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