申请/专利权人：派德洛格(天津)生物科技有限公司

申请日：2020-08-18

公开（公告）日：2024-06-14

公开（公告）号：CN114075602B

主分类号：C12Q1/6886

分类号：C12Q1/6886;C12Q1/6841;C12Q1/682;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.14#授权;2022.03.11#实质审查的生效;2022.02.22#公开

摘要：本发明提供了一种检测人CCDC6‑RET融合基因的探针、试剂、试剂盒、检测方法及应用，涉及分子生物学和肿瘤学技术领域。检测人CCDC6‑RET融合基因的探针，包括检测CCDC6基因的探针A和检测RET基因的探针B，其中优选探针A检测CCDC6基因1号外显子，和或所述探针B检测RET基因12号外显子。通过采用所述探针A和探针B组合使用对人CCDC6‑RET融合基因进行原位检测，可直接通过判断两种探针的荧光位点是否靠近来肉眼观察细胞或者临床组织样本中目标基因在细胞核内的定位和拷贝数。

主权项：1.原位检测人CCDC6-RET融合基因的试剂盒，其特征在于，包括探针锁定处理体系、细胞通透处理体系、平末端处理体系、目的核苷酸暴露处理体系、信号放大处理体系、信号检测处理体系，和清洗处理体系；所述探针锁定处理体系包含：检测CCDC6基因1号外显子的探针A、检测RET基因12号外显子的探针B、DNA连接酶、DNALigasebuffer、ATP和无核酸酶超纯水；所述探针A和探针B均包括三个区域：（1）5’端同源区，与目的基因的5’端序列互补结合；（2）3’端同源区，与目的基因的3’端序列互补结合；（3）环化区，与荧光探针互补结合，环化区位于5’端同源区和3’端同源区之间；所述探针A和探针B选自如下：核苷酸序列如SEQIDNO.11所示的探针A和核苷酸序列如SEQIDNO.16所示的探针B，或核苷酸序列如SEQIDNO.15所示的探针A和核苷酸序列如SEQIDNO.8所示的探针B，或核苷酸序列如SEQIDNO.13所示的探针A和核苷酸序列如SEQIDNO.18所示的探针B；所述细胞通透处理体系包含：浓度为5mgmL~30mgmL的蛋白酶K、Tris-HCl缓冲液、EDTA、SDS；所述平末端处理体系包含：选自FspI酶、Cac8I酶或CdiI酶的切割CCDC6基因1号外显子核酸内切酶，选自Rsal酶、Hpyl8I酶、MslI酶或AleI酶的切割RET基因12号外显子的核酸内切酶，CutSmartbuffer，无核酸酶超纯水；所述目的核苷酸暴露处理体系包含：LambdaExonuclease、Exonucleasebuffer、无核酸酶超纯水；所述信号放大处理体系包含：DNA聚合酶、DNApolymerasebuffer、dNTPs、DTT和无核酸酶超纯水；所述信号检测处理体系包含：荧光探针A’和荧光探针B’、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、鲑鱼精子DNA和无核酸酶超纯水；所述荧光探针A’和所述荧光探针B’分别结合在含重复序列的单链环状探针A和探针B上；所述清洗处理体系包括：Tris-HCl、NaCl、Tween20和无核酸酶超纯水。

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