申请/专利权人：派德洛格(天津)生物科技有限公司

申请日：2020-08-18

公开（公告）日：2024-06-14

公开（公告）号：CN114075593B

主分类号：C12Q1/6841

分类号：C12Q1/6841;C12Q1/6827;C12Q1/682;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.14#授权;2022.03.11#实质审查的生效;2022.02.22#公开

摘要：本发明提供了一种检测人RET基因12号外显子的探针试剂盒、检测方法及应用。所述探针包括三个区域：15’端同源区，与目的基因的5’端序列互补结合；23’端同源区，与目的基因的3’端序列互补结合；3环化区，与荧光探针互补结合，环化区位于5’端同源区和3’端同源区之间；其中，3’同源区的碱基数量为20‑24nt，GC含量为47.8‑55％；5’同源区的碱基数量为12‑15nt，GC含量为60‑75％；3’同源区的Tm值比5’同源区的Tm值高‑3‑15℃，且5’端同源序列Tm值大于45℃。采用所述探针进行原位检测，可直接肉眼观察细胞或者临床组织样本中人RET基因在细胞核内的定位和拷贝数。

主权项：1.原位检测人RET基因12号外显子的试剂盒，其特征在于，包括探针锁定处理体系、细胞通透处理体系、平末端处理体系、目的核苷酸暴露处理体系、信号放大处理体系、信号检测处理体系，和清洗处理体系；所述探针锁定处理体系包含：检测RET基因12号外显子的探针、DNA连接酶、DNALigasebuffer、ATP和无核酸酶超纯水；所述检测RET基因12号外显子的探针包括三个区域：（1）5’端同源区，与目的基因的5’端序列互补结合；（2）3’端同源区，与目的基因的3’端序列互补结合；（3）环化区，与荧光探针互补结合，环化区位于5’端同源区和3’端同源区之间；所述检测RET基因12号外显子的探针的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述细胞通透处理体系包含：浓度为5mgmL~30mgmL的蛋白酶K、Tris-HCl缓冲液、EDTA、SDS；所述平末端处理体系包含：选自Rsal酶、Hpyl8I酶、MslI酶或AleI酶的核酸内切酶，CutSmartbuffer，无核酸酶超纯水；所述目的核苷酸暴露处理体系包含：LambdaExonuclease、Exonucleasebuffer、无核酸酶超纯水；所述信号放大处理体系包含：DNA聚合酶、DNApolymerasebuffer、dNTPs、DTT和无核酸酶超纯水；所述信号检测处理体系包含：荧光探针、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、鲑鱼精子DNA和无核酸酶超纯水；所述荧光探针结合在所述检测RET基因12号外显子的探针上；所述清洗处理体系包括：Tris-HCl、NaCl、Tween20和无核酸酶超纯水。

全文数据：

权利要求：

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