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申请/专利权人：四川大学
申请日：2024-02-06
公开（公告）日：2024-06-18
公开（公告）号：CN118206630A
主分类号：C07K14/55
分类号：C07K14/55;C12N15/70;C12N15/75;C07K1/16
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.18#公开
摘要：本发明提供的一种重组人白介素‑2或和其突变体在原核体系中可溶性表达及高效纯化的方法，该方法利用两个及以上的Sumo序列串联融合的方法，实现人IL‑2在大肠杆菌表达体系中的可溶性表达，避免了传统大肠杆菌体系表达IL‑2形成包涵体，避免IL‑2及IL‑2M以无结构、无活性的包涵体形式表达，避免下游进行IL‑2蛋白复性的工序；并通过简单的层析步骤从组分复杂的细菌破碎上清液体系中高效纯化得到rhIL‑2及IL‑2M蛋白；具有操作简便，适合规模化放大、周期短、纯度高、工艺稳定等特点。
主权项：1.一种可溶性表达及高效纯化重组人白介素-2及或其突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、将人源白介素-2或和人源白介素-2突变体的基因序列与两个及以上的小泛素相关修饰物串联基因序列的3’末端拼接，获得His-Sumon-IL-2n为≥2，自然数或和其突变体的基因序列；步骤2、将步骤1得到的His-Sumon-IL-2或和其突变体的基因序列插入原核体系表达质粒载体中，之后将质粒载体转入原核感受态细胞中；步骤3、通过抗性涂板挑选优势生长菌落，进行扩大培养，并通过干预启动子进行目的基因转录和翻译表达得到融合蛋白His-Sumon-IL-2或其突变体；步骤4、裂解菌体，离心获得上清液，通过第一次金属螯合层析从上清液中纯化获取较高纯度重组His-Sumon-IL-2或和其突变体融合蛋白，经酶切除去His-Sumon融合序列后，再通过第二次金属螯合层析，得到重组人源白介素-2或和其突变体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 四川大学 一种重组人白介素-2或/和其突变体在原核体系中可溶性表达及高效纯化的方法
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