申请/专利权人：成都百思赛弗生物科技有限公司

申请日：2024-05-21

公开（公告）日：2024-06-18

公开（公告）号：CN118207307A

主分类号：C12Q1/686

分类号：C12Q1/686;C12Q1/70;C12N15/11;C12R1/93

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.18#公开

摘要：本发明公开了一种新型PCR冻干微球扩增试剂及其制备方法，属于分子生物学技术领域。该试剂包括冻干微球制备和缓冲盐干燥晶体制备两个过程。冻干微球依托大分子高聚物为核心，构建冻干赋形剂骨架分子组合。保证在液氮滴球和程序冻干升华过程中，维持滴球的骨架结构和保护酶活性的作用。将缓冲盐干燥晶体预先分装到八联管中，采用高温干燥制备成化学干粉，再将冻干微球组装到八联管中。该PCR冻干微球在室温下稳定保存1年不影响扩增活性；以解决PCR试剂不能常温保存与运输的问题。同时，通过两种不同干燥工艺，解决目前PCR冻干微球生产过程中普遍存在的，酶和镁离子预先混合而导致的灵敏度和特异性下降等突出问题。

主权项：1.一种新型PCR冻干微球扩增试剂，其特征在于，所述新型PCR冻干微球扩增试剂是由1份固态PCR冻干微球加入到1份固态PCR缓冲盐干燥晶体中得到；所述PCR冻干微球中包含高聚物冻干赋形剂、脱氧核糖核酸三磷酸、引物、探针、分散剂和无甘油聚合酶；所述高聚物冻干赋形剂是由如下组分的重量百分数制备得到：聚乙二醇0.1~1.0%，牛血清白蛋白0.005~0.05%，环糊精0.1~1%，支链淀粉0.1~1%，聚乙烯吡咯烷酮0.1~0.5%，葡聚糖0.5~5%，聚蔗糖0.5~5%，甘露醇0.5~5%和明胶0.01~0.05%；所述脱氧核糖核酸三磷酸、引物、探针、分散剂、无甘油聚合酶和高聚物冻干赋形剂的体积比为1μL：0.2μL：0.05μL：0.1μL：0.85μL：6.8μL；所述脱氧核糖核酸三磷酸是由dATP、dGTP、dCTP和dUTP体积比为1:1:1:2组成；所述引物包括HBV上游引物和HBV下游引物，所述HBV上游引物核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述HBV下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述探针为HBV探针，核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述引物和探针的体积比为2:1；所述分散剂为吐温-20；所述无甘油聚合酶包括M-MLV逆转录酶、AMV逆转录酶、TaqDNA聚合酶、PfuDNA聚合酶和TthDNA聚合酶中的任意一种或多种。

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权利要求：

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