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T7 RNA聚合酶突变体及其应用 

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申请/专利权人:翌圣生物科技(上海)股份有限公司

摘要:本发明在野生型T7RNA聚合酶基础上通过一个或多个不同位点的氨基酸突变,得到了一系列T7RNA聚合酶突变体,与野生型相比,具有更低的dsRNA副产物、更高的产物完整度、更高的产量或转录活性中的一个或多个。本发明的dsRNA副产物降低的T7RNA聚合酶突变体比野生型T7RNA聚合酶更适用于体外转录体系,副产物极低、纯度更高,经过简单纯化即可满足RNA药物或mRNA疫苗要求,能极大降低下游纯化操作难度及成本,且转录产物质量高,具有更低的免疫副作用。本发明的T7RNA聚合酶突变体可能还包括以下一个或多个性能:更高的产物完整度、更高的转录产量、更高的转录活性等。

主权项:1.一种T7RNA聚合酶突变体,其特征在于为如下a1-a4中任一所述的蛋白质:a1:在氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的野生型T7RNA聚合酶的如下一个或至少两个位置发生氨基酸替换的蛋白质:I6、F11、I19、K60、N67、A70、I82、N86、D87、F162、K180、V186、V214、N233、A247、P277、M369、Y457、A465、H523、K610、A615、L651、S686、K740、N764;a2:将a1所示的氨基酸序列经过除前述突变以外的一个或几个氨基酸残基的取代和或缺失和或添加得到的具有基本相同的酶活性及功能的蛋白质;a3:与a1的蛋白质具有90%以上的序列同源性,且酶活性及功能与a1的蛋白质基本相当的蛋白质;a4:将a1-a3中任一所述的氨基酸序列的N端或和C端连接标签或酶切位点得到的融合蛋白质,该标签或酶切位点不影响T7RNA聚合酶突变体的功能。

全文数据:

权利要求:

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