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申请/专利权人：中国农业大学
申请日：2024-03-08
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN118226042A
主分类号：G01N33/68
分类号：G01N33/68;C12Q1/686;C12Q1/6869;C12Q1/6895;C12N15/11
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.21#公开
摘要：本发明涉及基因工程技术领域，提出了一种基于特异性区分小麦谷蛋白1Dx优质亚基的检测方法，包括将小麦粉与提取缓冲液混合，通过搅拌充分提取蛋白质进行SDS‑PAGE胶电泳及考染，使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒依照说明书提取小麦基因组DNA，通过纯化步骤如乙醇沉淀去除杂质，得到足够纯净的基因组DNA，准备PCR反应混合物，包括特异性引物、dNTPs、DNA模板、PCR缓冲液及DNA聚合酶，在PCR机中设置相应的循环程序，包括变性、退火、延伸步骤，进行PCR扩增，根据PCR产物测序得到的序列全长的比对，在差异位点进行特异InDel引物1‑D4FR和1‑D5FR的设计，对不同小麦基因组DNA进行扩增，设置适当电压，进行电泳，然后利用紫外光源下的凝胶成像系统观察PCR产物条带，通过上述技术方案，解决了现有技术中检测不够精确和检测周期长的问题。
主权项：1.一种基于特异性区分小麦谷蛋白1Dx优质亚基的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1：首先提取11个待测小麦的高分子谷蛋白；步骤S2：采用SDS-PAGE方法进行电泳，利用聚丙烯酰胺凝胶在恒压条件下进行电泳分离；步骤S3：对电泳后的凝胶进行考染，使高分子量谷蛋白条带清晰可读；步骤S4：提取待测11个小麦的基因组DNA作为模板；步骤S5：采用保守引物对小麦基因组DNA进行PCR扩增，获得PCR扩增产物，将扩增产物送公司测序，得到与谷蛋白电泳结果相对应的不同亚基基因类型的序列全长；步骤S6：根据不同亚基基因类型的序列差异，开发能够特异性区分1Dx优质亚基基因1Dx4或1Dx5亚基的引物序列1-D4FR和1-D5FR，分别对小麦基因组DNA进行PCR扩增,得到PCR扩增产物，对PCR扩增产物进行电泳检测，根据电泳结果判断待测小麦是否含有1Dx4或1Dx5亚基。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国农业大学 一种基于特异性区分小麦谷蛋白1Dx优质亚基的检测方法
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