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申请/专利权人：南京医科大学
申请日：2022-11-17
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN115772539B
主分类号：C12N15/85
分类号：C12N15/85;C12N15/113;C12N15/55;C12N15/89;A01K67/0276
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.21#授权;2023.03.28#实质审查的生效;2023.03.10#公开
摘要：本发明属于医药领域，具体涉及一种具有Ⅰ型气管发育不全表型的双侧肺脏缺失小鼠模型及其构建方法。本发明利用CRISPRCas9，通过删除TTF‑1基因的第二外显子序列，制备一种气管和食管完全分离的双侧肺脏缺失的小鼠模型。本发明构建的小鼠模型可应用于囊胚干细胞互补研究并实现器官再生，同时可检测干细胞的嵌合能力和向组织器官发育的分化潜能；为探索TTF‑1基因在胚胎发育中的作用提供研究材料，为其他肺脏缺失动物模型（如大鼠、兔、猪、牛、羊等）的制备提供研究思路。
主权项：1.一种具有Ⅰ型气管发育不全表型的双侧肺脏缺失小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下具体步骤：（1）寻找小鼠TTF-1基因，确定第二外显子编码区作为目标区域；（2）体外转录获得sgRNA和cas9mRNA，将其显微注射到小鼠的细胞受精卵内，培养24h后，通过胚胎移植，将存活的细胞移植到同期发情的CD1假孕母鼠的输卵管中，通过手术获得发育到期的子鼠；（3）PCR测序确认TTF-1第二外显子双等位基因敲除子鼠，小鼠模型构建成功；所述sgRNA包括sgRNA1、sgRNA2，所述sgRNA1的序列为：5'-TGACATCTTGAGTCCCCTGG-3'，如SEQIDNo:1所示；所述sgRNA2的序列为：5'-CGCCTACCACATGACGGG-3'，如SEQIDNo:2所示。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京医科大学 一种具有Ⅰ型气管发育不全表型的双侧肺脏缺失小鼠模型及其构建方法
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