申请/专利权人：上海交通大学医学院附属第九人民医院

申请日：2022-06-06

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN115058394B

主分类号：C12N5/09

分类号：C12N5/09;C12Q1/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.21#授权;2022.10.04#实质审查的生效;2022.09.16#公开

摘要：本发明公开了一种腺样囊性癌类器官模型、其构建方法和应用，所述构建方法包含，步骤一，完全培养基的配制：在基础培养基中加入生长因子，得到完全培养基；步骤二，离体腺样囊性癌肿瘤组织的活化；步骤三，腺样囊性癌肿瘤组织预处理；步骤四，PDO模型的构建，在所述细胞悬液中加入终止培养基终止消化，经过滤、离心、弃上清后得到细胞沉淀，利用所述完全培养基将所述细胞沉淀重悬并计数，再次离心后用所述完全培养基重悬，将重悬后细胞悬液与基质胶按照预设比例混合，得到具有一定细胞浓度的混合物，将所述混合物接种于多孔细胞培养板中，待基质胶凝固后，继续培养，得到PDO模型，该模型可应用于腺样囊性癌药物的筛选。

主权项：1.一种腺样囊性癌类器官模型的构建方法，其特征在于，包含以下步骤：步骤一，完全培养基的配制：在基础培养基中加入生长因子，得到完全培养基；步骤二，离体腺样囊性癌肿瘤组织的活化：取部分所述完全培养基，在完全培养基中加入1％～2％的青霉素-链霉素得到原代完全培养基，将离体腺样囊性癌肿瘤组织放置于所述原代完全培养基中，低温活化；步骤三，腺样囊性癌肿瘤组织预处理：将步骤二中活化处理后的腺样囊性癌肿瘤组织分切成肿瘤小块，用混合预制酶重悬所述肿瘤小块，并通过全自动组织处理器处理，将处理后的肿瘤小块继续进行消化处理，得到细胞悬液；所述混合预制酶包含Liberase酶、透明质酸酶、胶原IV型酶和DNaseI中的任意两种以上的组合；步骤四，PDO模型的构建：在所述细胞悬液中加入终止培养基终止消化，经过滤、离心、弃上清后得到细胞沉淀，利用所述完全培养基将所述细胞沉淀重悬并计数，再次离心后用所述完全培养基重悬得到重悬后细胞悬液，将重悬后细胞悬液与基质胶按照预设比例混合，得到具有一定细胞浓度的混合物，将所述混合物接种于多孔细胞培养板中，待基质胶凝固后，继续培养，得到PDO模型；所述预设比例是指重悬后细胞悬液与所述基质胶的体积比为3:2；其中，所述生长因子包含HEPES、Glutamax、胎牛血清、青霉素-链霉素、Primocin、B27、N2、NAC、烟酰胺、4％～8％R-spondin1、4％Noggin、50ngmLrhEGF、5ngmLrhFGF2、10ngmLrhFGF10、1μmolL～2μmolL前列腺素AE2、0.5～1μmolLA83-01、10μmolL～20μmolLY27632、0.3μmolL～0.5μmolLCHIR99021、1μmolL～2μmolLForskolin、2μgmL～4μgmL氢化可的松及2％～4％胰岛素-转铁蛋白-硒；前述的百分浓度为质量浓度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海交通大学医学院附属第九人民医院 一种腺样囊性癌类器官模型、其构建方法和应用

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