申请/专利权人：南开大学;上海臻格生物技术有限公司

申请日：2020-09-22

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN114829407B

主分类号：C07K16/46

分类号：C07K16/46;C12N5/00;C07K16/00;C12N7/01

优先权：["20190923 CN 2019108987315"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.21#授权;2024.05.21#著录事项变更;2022.08.16#实质审查的生效;2022.07.29#公开

摘要：公开了将哺乳动物展示与流式分选术、二代测序等技术相结合，筛选与特定FcγR结合能力增强的Fc变体的方法，以及由此筛选获得的Fc变体。

主权项：1.用于筛选Fc受体结合性质改变的Fc变体多肽的方法，其中使用在细胞表面上展示Fc多肽的哺乳动物细胞文库,其中所述Fc多肽从N端到C端为：i信号序列、ii标签序列、iii由铰链区与CH2和CH3结构域组成的Fc区、和iv跨膜结构域，其中ii-iv之间任选地由接头连接，且其中所述哺乳动物细胞为具有蛋白质岩藻糖基化缺陷的细胞，其中所述方法包括：a构建所述展示Fc多肽的哺乳动物细胞文库，其中将在Fc区的一个或多个区域中包含突变的多数个Fc变体多肽编码核酸序列，引入哺乳动物细胞中并表达，形成所述展示文库，其中文库中每个哺乳动物细胞克隆在其表面上展示Fc变体多肽；b通过流式细胞术，基于细胞表面上的Fc变体多肽与目的Fc受体的结合性质，分选文库中的细胞克隆；c对分选获得的细胞群体进行Fc变体多肽编码核酸中突变区域的深度测序和聚类分析，选择Fc受体结合性质改变的Fc变体多肽；其中所述聚类分析包括：-将深度测序获得的序列，转化为其编码的氨基酸序列，根据每种氨基酸序列的出现频数进行序列排序，由此确定优势氨基酸序列；任选地，进一步通过对所述转化的氨基酸序列进行多序列比对，确定一个或多个指定氨基酸位置的优势氨基酸残基，-选择包含优势氨基酸序列的Fc变体多肽，任选地，所述Fc变体多肽还包含一个或多个优势氨基酸残基,其中，步骤c的聚类分析还包括：将分选后的细胞群体的深度测序结果，与参考细胞群体的深度测序结果进行比较，显示优势氨基酸残基的变化，以确定Fc多肽序列中有利于引入突变以改变Fc多肽的Fc受体结合性质的优势氨基酸位置，和或确定有利于改变Fc多肽的Fc受体结合性质的优选序列基序，其中，参考细胞群体是未经分选的文库细胞群体，或在进行多轮分选的情况下，经历了1轮或多轮分选的文库细胞群体。

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权利要求：

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