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申请/专利权人：天津大学

摘要：本发明公开了一种共价有机网络材料CONs原位包埋固定化酶的制备方法，基于一锅法共沉淀策略，以酶诱导醛基与氨基间的席夫碱反应对酶进行原位固定化制备了酶@CONs，在酶表面形成CONs多孔性保护涂层，实现了原位制备CONs固定化酶颗粒及高效负载酶分子。基于强共价键的CONs，赋予酶分子在非生物条件下仍具有优异的稳定性和活性回收率，有效降低生物催化剂的使用成本和操作条件；此外，相较于常用的酶@MOFs，CONs的多级孔结构有效降低了固定化酶介质导致的传质阻力，加速了底物产物的快速扩散，从而表现出更高的反应活性和底物转化效率。本发明制备方法简单易行，适用于构建一系列酶@CONs固定化酶颗粒。

主权项：1.一种共价有机网络材料原位包埋固定化酶的制备方法，其特征在于，基于一锅法共沉淀策略，以酶诱导醛基与氨基间的席夫碱反应对酶进行原位固定化制备了酶共价有机网络材料，在酶表面形成共价有机网络材料多孔性保护涂层，实现了原位制备共价有机网络材料固定化酶颗粒及高效负载酶分子；包括以下步骤：步骤一、室温下，在磁力搅拌下分别将三醛基间苯三酚与联苯胺均以2:3的摩尔比分别分散于等体积的乙醇溶液中，充分搅拌，获得三醛基间苯三酚乙醇分散液和联苯胺乙醇分散液；步骤二、将三醛基间苯三酚乙醇分散液和联苯胺乙醇分散液混合，然后以1:10的体积比向该混合溶液中加入7.5mgmL的聚乙烯吡咯烷酮修饰的葡萄糖氧化酶溶液，继续搅拌30min，将得到的悬浊液离心，以PBS缓冲液洗涤3次，冻干12个小时所得颗粒即为共价有机网络材料原位包埋固定化酶，简称为GOx@TpBD；步骤一中，磁力搅拌的转速为400-1000rpm；后续充分搅拌的时间为15-35min；步骤二中，浓度为7.5mgmL的聚乙烯吡咯烷酮修饰的葡萄糖氧化酶溶液的制备方法是：以浓度为100mM，pH＝7.0的PBS缓冲液为溶剂制备一定浓度的葡萄糖氧化酶溶液，将该葡萄糖氧化酶溶液与一定体积的聚乙烯吡咯烷酮溶液等体积混合，摇床孵化反应15min，即为所得，简称为PVPGOx溶液；步骤二中，将三醛基间苯三酚乙醇分散液和联苯胺乙醇分散液混合是以800rpm的转速搅拌30min；步骤二中，悬浊液离心的转速为10000rpm，时间为5min。

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