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申请/专利权人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所

摘要：本发明涉及一种禽腺病毒血清4型MSN‑CC‑Fiber2纳米颗粒疫苗的制备与应用，纳米颗粒疫苗的制备包括以下步骤：1先制备禽腺病毒血清4型的Fiber2蛋白；2MSN‑CC纳米颗粒制备；3制备MSN‑CC‑Fiber2纳米疫苗。本发明基于MSN技术合成的MSN‑CC具有孔径大且负载量高等特点，不仅能提高大分子蛋白的负载能力，且能提高抗原的利用率。本研究合成了大孔径、高孔容MSN‑CC纳米颗粒，并将病毒保护性抗原Fiber2蛋白纯化后负载到MSN‑CC纳米颗粒中，制备了MSN‑CC‑Fiber2纳米疫苗。该纳米疫苗免疫保护效果好，MSN‑CC纳米颗粒具有佐剂效应。

主权项：1.一种禽腺病毒血清4型MSN-CC-Fiber2纳米颗粒疫苗的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：1制备禽腺病毒血清4型的Fiber2蛋白；2MSN-CC纳米颗粒制备：将十六烷基三甲基氯化铵、三乙醇胺，超纯水，一起加入到三口烧瓶中，60℃下60rmin搅拌1h，使十六烷基三甲基氯化铵完全溶解；然后迅速加入有机混合物，其中，有机混合物为正硅酸四乙酯与氯苯按体积比为1:7混合而成，之后再补加超纯水，60℃、60rmin搅拌混合反应12h；反应结束后8000rpm离心10min，弃上清；收集产物并60℃烘干15-20h至完全干燥，再移至管式炉中550℃煅烧4h，然后研磨成粉末状，得到MSN-CC纳米颗粒，干燥保存在4℃冰箱；3制备MSN-CC-Fiber2纳米疫苗：通过物理吸附方式负载Fiber2蛋白，蛋白浓度为4.2mgmL；使用前先将MSN-CC纳米颗粒粉末用pH8.0Tris缓冲液重悬成1mgmL，并在冰浴条件下超声10min使其分散均匀，之后再在4℃条件下将Fiber2蛋白与重悬后的MSN-CC纳米颗粒粉混合，放于旋转混合仪上摇晃，使MSN-CC纳米颗粒和Fiber2蛋白充分接触，吸附12-16h，使Fiber2蛋白负载到MSN-CC纳米颗粒空隙中，8000rpm离心10min，用去离子水洗涤两次，去除未吸附的Fiber2蛋白，真空冷冻干燥后得禽腺病毒血清4型MSN-CC-Fiber2纳米颗粒疫苗。

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