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申请/专利权人：山西农业大学
摘要：本发明公开了一种基于原核表达的嵌合PCV2中和表位的PCV3VLPs及其制备和应用，该制备方法包含：1构建重组质粒pET‑28a‑Cap3‑Cap2E：在如SEQIDNO.2所示的PCV3Cap序列的5’端加入限制性内切酶BamHⅠ序列，将PCV2Cap的两个不同的中和表位序列以及限制性内切酶XhoⅠ序列添加到cap3序列的3’端，合成序列并克隆入pET‑28a载体，得到重组质粒；2重组载体原核表达；3重组蛋白的纯化；4VLP的组装。本发明制备的嵌合PCV2中和表位的PCV3VLPs与野生型病毒外形相似性高，具备很好的免疫原性。
主权项：1.一种基于原核表达的嵌合PCV2中和表位的PCV3VLPs的制备方法，其特征在于，该制备方法包含：1构建重组质粒pET-28a-Cap3-Cap2E在如SEQIDNO.2所示的PCV3Cap序列的5’端加入限制性内切酶BamHⅠ序列，将PCV2Cap的两个不同的中和表位序列SEQIDNO.4～5以及限制性内切酶XhoⅠ序列添加到cap3序列的3’端，最终序列为SEQIDNO.3，合成序列SEQIDNO.3并克隆入pET-28a载体，得到重组质粒pET-28a-Cap3-Cap2E；2重组载体原核表达将所述重组质粒pET-28a-Cap3-Cap2E转化至表达感受态细胞中，挑取单克隆接种至培养基中，摇床过夜培养，得到重组蛋白表达菌pET-28a-Cap3-Cap2ERosettaDE3；将培养好的菌液接种于培养基中培养至OD600为0.6时，加入IPTG诱导表达；3重组蛋白的纯化离心收集菌体，蛋白缓冲液重悬，低温超声破碎进行处理，离心，收集上清，滤膜过滤，浓缩液使用凝胶过滤层析柱进行纯化；4VLP的组装将纯化完成的重组蛋白装入透析袋中，置于蛋白体积50倍的组装缓冲液中，4℃缓慢搅拌，中途换液若干次，透析结束后，收集透析袋里的液体，获得基于原核表达的嵌合PCV2中和表位的PCV3VLPs。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 山西农业大学 基于原核表达的嵌合PCV2中和表位的PCV3 VLPs及其制备和应用
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