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申请/专利权人：昆明理工大学
摘要：本发明涉及一种间充质细胞3D球的玻璃化冻存方法。包括冻存液配制、复苏液配制、人脐带来源间充质干细胞3D培养、降温程序、升温程序、微流控操作、细胞毒性检测、细胞存活率增殖能力检测，以及体内实验检验功能性等。本发明采用微流控技术用材料包裹细胞3D球，用DMSO、乙二醇配制冻存液，用DMSO、乙二醇和蔗糖配制复苏液，以达到更好的冻存效果，复苏后存活率可达到95％。本发明利用微流控降低了操作过程中对细胞球造成的物理损害，利用冻存液减少冰结晶对细胞的损伤，确保冻存后人脐带来源间充质细胞依然有较高的存活率和功能性。
主权项：1.一种间充质细胞3D球的玻璃化冻存方法，其特征在于，所述冻存方法包括以下步骤：步骤1间充质干细胞3D培养成间充质干细胞3D球；步骤2收集步骤1间充质干细胞3D球进行微流控包胶操作：将间充质干细胞3D球分散在水相溶剂中，混合均匀；调整油相溶剂与水相溶剂的流速比，使其形成油包水的微液滴，确保每个微液滴中包裹一个间充质干细胞3D球，收集于低吸附培养皿中；将培养皿中收集微液滴放在蓝光下进行照射固化40-90s，形成包裹了固态水相溶剂的间充质细胞3D球，使用30-37℃的生理盐水对间充质细胞3D球进行冲洗，洗净油相溶剂，最后收集在PBS中备用；步骤3间充质干细胞3D球玻璃化冻存：将步骤2收集的间充质细胞3D球放入冻存液I中，室温孵育10-15min；随后将冻存液I去除，加入冻存液II，0-4℃孵育10-15min；孵育结束后，快速将间充质干细胞3D球转移至尼龙网片上，再将尼龙网放于无菌纸上吸干多余的冻存液；用无菌镊子夹住盛有间充质干细胞3D球的尼龙网片，快速放入液氮中，30-60s后放入提前预冷的细胞冻存管中，拧上管盖，放入细胞液氮储存罐中。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 昆明理工大学 一种间充质细胞3D球的玻璃化冻存方法
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