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申请/专利权人：苏州博腾生物制药有限公司

摘要：一种生成细胞系的方法，所述细胞系用于在悬浮细胞培养中产生病毒。所述方法包括：生成在贴壁细胞培养中生长的多个细胞克隆；鉴定具有高转染效率的一组细胞克隆；生成在悬浮细胞培养中生长的多个细胞克隆；以及鉴定适合于在悬浮细胞培养中产生病毒的细胞克隆。本文所公开的方法中的所述方法可以将驯化时间从至少1个月缩短到7‑14天，并且还可以大大减少驯化过程期间使用的培养基的量，从而降低生产成本。

主权项：1.一种生成细胞系的方法，所述细胞系用于在悬浮细胞培养中产生病毒，所述方法包括：i生成在贴壁细胞培养中生长的多个细胞克隆，每个细胞克隆包括一组共享共同祖细胞的细胞；ii通过以下操作来鉴定具有高转染效率的一组细胞克隆：分别从每个细胞克隆中分配部分细胞；分别用包括第一报告基因的报告质粒转染来自每个细胞克隆的所述部分细胞；以及根据所述第一报告基因在来自每个细胞克隆的所述部分细胞中的表达，从所述多个细胞克隆中鉴定具有高转染效率的一组细胞克隆；iii通过以下操作来生成在悬浮细胞培养中生长的多个细胞克隆：分别从所述具有高转染效率的一组细胞克隆中的每个细胞克隆中分配部分细胞；分别在培养基中培养来自所述具有高转染效率的一组细胞克隆中的每个细胞克隆的所述部分细胞，所述培养基允许来自所述具有高转染效率的一组细胞克隆中的每个细胞克隆的所述部分细胞在悬浮细胞培养中生长，从而生成在悬浮细胞培养中生长的多个细胞克隆；以及iv通过以下操作来生成适合于在悬浮细胞培养中产生病毒的细胞系：分别从所述在悬浮细胞培养中生长的多个细胞克隆中的每个细胞克隆中分配部分细胞；分别用a包括第二报告基因的病毒转移质粒和b病毒包装质粒转染来自所述在悬浮细胞培养中生长的多个细胞克隆中的每个细胞克隆的所述部分细胞；分别收集由来自所述在悬浮细胞培养中生长的多个细胞克隆中的每个细胞克隆的所述部分细胞产生的病毒；分别用由来自所述在悬浮细胞培养中生长的多个细胞克隆中的每个细胞克隆的所述部分细胞产生的所述病毒转导细胞；以及根据所述第二报告基因在所述细胞中的表达，从所述在悬浮细胞培养中生长的多个细胞克隆中选择产生高滴度病毒的细胞克隆，从而生成适合于在悬浮细胞培养中产生病毒的所述细胞系。

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